tailieunhanh - Ứng dụng PCR kỹ thuật số vi giọt trong định lượng tuyệt đối nồng độ ARN

PCR kỹ thuật số vi giọt (Droplet Digital PCR - ddPCR) là phương pháp PCR sử dụng hệ thống vi giọt, cho phép đo lường hàng nghìn sự kiện khuếch đại độc lập trong một phản ứng đơn lẻ. Bài viết trình bày ứng dụng PCR kỹ thuật số vi giọt trong định lượng tuyệt đối nồng độ ARN. | TẠP CHÍ Y DƯỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 5 - 2023 ỨNG DỤNG PCR KỸ THUẬT SỐ VI GIỌT TRONG ĐỊNH LƯỢNG TUYỆT ĐỐI NỒNG ĐỘ ARN Nguyễn Lĩnh Toàn1 2 Bùi Khắc Cường1 2 Tóm tắt Mục tiêu PCR kỹ thuật số vi giọt Droplet Digital PCR - ddPCR là phương pháp PCR sử dụng hệ thống vi giọt cho phép đo lường hàng nghìn sự kiện khuếch đại độc lập trong một phản ứng đơn lẻ. Kỹ thuật ddPCR cho phép sử dụng lượng mẫu và thuốc thử thấp hơn đồng thời giảm chi phí tổng thể so với các phương pháp khác trong khi vẫn duy trì độ nhạy và độ chính xác cao. Phương pháp nghiên cứu Nghiên cứu tiến hành theo phương pháp thực nghiệm sử dụng ddPCR để định lượng RNA trong mẫu nghiên cứu. Quá trình định lượng trên hệ thống PCR kỹ thuật số vi giọt gồm các bước Tạo vi giọt khuếch đại đọc vi giọt và phân tích dữ liệu để tính toán nồng độ RNA. Kết quả Nồng độ RNA trong các mẫu không pha loãng pha loãng với hệ số 10 và 100 lần lượt là 380 bản sao µL 40 7 bản sao µL và 3 4 bản sao µL. Biểu đồ phân bố tín hiệu cho thấy sự khác biệt rõ rệt về cường độ tín hiệu giữa hai quần thể vi giọt có và không có sản phẩm khuếch đại. Dữ liệu cho thấy mối tương quan tuyến tính thuận rất chặt chẽ giữa lượng RNA với hệ số pha loãng. Kết luận PCR kỹ thuật số vi giọt là kỹ thuật có độ nhạy cao trong định lượng tuyệt đối nồng độ RNA. Từ khoá PCR kỹ thuật số vi giọt ddPCR Định lượng. APPLICATION OF DROPLET DIGITAL PCR FOR RNA ABSOLUTE QUANTIFICATION Abstract Objectives Droplet Digital PCR ddPCR is a PCR method using a microdroplet system that allows the measurement of thousands of independent amplification events in a single reaction. The ddPCR technique requires lower sample and reagent volumes 1 Trung tâm Nghiên cứu động vật thực nghiệm Học viện Quân y 2 Bộ môn Sinh lý bệnh Học viện Quân y Tác giả liên hệ Bùi Khắc Cường buikhaccuong@ Ngày nhận bài 24 4 2023 Ngày được chấp nhận đăng 02 6 2023 http 30 TẠP CHÍ Y DƯỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 5 - 2023 and reduces overall costs compared to other methods while .