tailieunhanh - Nghiên cứu sản xuất enzyme Br512 tái tổ hợp và ứng dụng sàng lọc SARS-CoV-2 bằng kĩ thuật khuếch đại đẳng nhiệt

Bài viết "Nghiên cứu sản xuất enzyme Br512 tái tổ hợp và ứng dụng sàng lọc SARS-CoV-2 bằng kĩ thuật khuếch đại đẳng nhiệt" nhằm sản xuất enzyme Br512 tái tổ hợp cho ứng dụng khuếch đại gene đích bằng công nghệ khuếch đại đẳng nhiệt qua trung gian vòng lặp (Loop-mediated isothermal amplification - LAMP) phát hiện SARS-CoV-2. | NGHIÊN CỨU - TRAO ĐỔI https 1859-1655 NGHIÊN CỨU SẢN XUẤT ENZYME Br512 TÁI TỔ HỢP VÀ ỨNG DỤNG SÀNG LỌC SARS-CoV-2 BẰNG KĨ THUẬT KHUẾCH ĐẠI ĐẲNG NHIỆT Nguyễn Phú Thành1 Đinh Thị Thảo1 Nguyễn Cẩm Thạch1 Bạch Thùy Dương1 Ngô Tất Trung1 Lê Hữu Song1 TÓM TẮT Mục tiêu Sản xuất enzyme Br512 tái tổ hợp cho ứng dụng khuếch đại gene đích bằng công nghệ khuếch đại đẳng nhiệt qua trung gian vòng lặp Loop-mediated isothermal amplification - LAMP phát hiện SARS-CoV-2. Vật liệu và phương pháp Plasmid pKAR2-Br512 mã hóa enzyme Br512 được biến nạp vào tế bào E. coli BL21 DE3 . Enzyme Br512 từ đó được biểu hiện bằng chất cảm ứng đặc hiệu IPTG sau đó được tinh sạch bằng phương pháp sắc kí ái lực. Đánh giá đặc tính của enzyme Br512 tự sản xuất so sánh với enzyme Bst Biolab NewEngland sử dụng phương pháp reverse transcription LAMP RT-LAMP phát hiện gen N của SARS-CoV-2. Thử nghiệm được tiến hành trên mẫu bệnh phẩm. Kết quả Br512 thu được có độ tinh sạch cao không tạp nhiễm các protein của vi khuẩn. Phản ứng RT-LAMP sử dụng enzyme Bst hoặc Br512 phát hiện gen N của SARS-CoV-2 với ngưỡng phát hiện lần lượt là 102 bản sao µL và 101 bản sao µL. Kết luận Biểu hiện và tinh sạch thành công enzyme Br512 và sử dụng trong xét nghiệm RT-LAMP để sàng lọc SARS-CoV-2 với ngưỡng phát hiện là 102 bản sao µL. Từ khóa SARS-CoV-2 khuếch đại đẳng nhiệt Bst polymerase. ABSTRACT Objectives To produce recombinant Br512 enzyme and investigate its application in RT-LAMP to detect SARS-CoV-2. Material and methods E. coli BL21 DE3 cells was transformed with pKAR2-Br512 encoding plasmid then induced with specific inducer IPTG the expressed Br512 enzyme was purified by affinity chromatography its activity was evaluated and compared with commercial Bst polymerase Biolab NewEngland in the RT-LAMP reaction for identifying the SARS-CoV-2 s N-gene. Clinical trials were conducted on patient samples as well. Results The inhouse Br512 enzyme was highly pure enough and retains its LAMP