tailieunhanh - Nghiên cứu xây dựng quy trình phát hiện kiểu gene VEGF và kiểu đột biến gene EGFR ứng dụng trong điều trị đích ung thư phổi

Mục tiêu nghiên cứu của bài viết này nhằm xây dựng quy trình xét nghiệm phát hiện kiểu gene VEGF và kiểu đột biến mất đoạn (Del19 (746-750)), đột biến điểm trên Exon21 (L858R) của gene EGFR. Mời các bạn cùng tham khảo bài viết để nắm chi tiết hơn nội dung nghiên cứu. | 24 NGHIÊN CỨU KHOA HỌC NGHIÊN CỨU XÂY DỰNG QUY TRÌNH PHÁT HIỆN KIỂU GENE VEGF VÀ KIỂU ĐỘT BIẾN GENE EGFR ỨNG DỤNG TRONG ĐIỀU TRỊ ĐÍCH UNG THƯ PHỔI Ngô Tất Trung1 Đinh Ngọc Sỹ2 Nguyễn Viết Nhung2 Đặng Văn Khiêm2 Vũ Xuân Phú2 Nguyễn Chi Lăng2 Hàn Trung Điền2 Đào Thanh Quyên1 và Lê Hữu Song1 1 Bệnh viện Trung ương Quân đội 108 2 Bệnh Viện Phổi Trung ương TÓM TẮT Đặt vấn đề Tiên lượng hiệu quả điều trị đích UTP phải dựa vào xét nghiệm xác định đột biến gene hoặc kiểu gene đích. Mục tiêu Xây dựng quy trình xét nghiệm phát hiện kiểu gene VEGF và kiểu đột biến mất đoạn Del19 746-750 đột biến điểm trên Exon21 L858R của gene EGFR. Vật liệu và phương pháp Các dòng tế bào UTPKTBN mang đột biến gene EGFR được nuôi cấy trong các điều kiện chuẩn. Tính đa hình của gen VEGF được xác định bằng phương pháp động học allele đặc hiệu real-time PCR. Đột biến gene EGFR được xác định bằng PCR đa mồi đặc hiệu allele hai hướng tích hợp công nghệ ARMS và kiểm tra lại bằng giải trình tự gene. Ngưỡng phát hiện và độ đặc hiệu của phương pháp được xác định bằng cách pha loãng nồng độ tế bào theo tỷ lệ 0 100 100 1 100 10 100 và 100 100 sau đó tiến hành tách DNA làm khuôn cho phản ứng PCR. Kết quả Đã hoàn thiện kỹ thuật động học allele đặc hiệu real-time PCR cho phép phát hiện đồng thời 2 thể đa hình Rs833061 và Rs3025039 của gene VGFR. Công nghệ PCR đặc hiệu hai hướng allele cũng cho phép xác định được đột biến gene EGFR tại exon 19 exon 21 với ngưỡng phát hiện là 0 1 . Độ đặc hiệu kỹ thuật là 100 . Giải trình tự gene đã khẳng định kết quả của PCR đa mồi. PCR đa mồi đặc hiệu allele hai hướng tích hợp công nghệ ARMS có ngưỡng phát hiện thấp hơn so với giải trình tự gene 0 1 so với 25 . Kết luận Chúng tôi đã xây dựng thành công phương pháp phát hiện kiểu gene VEGF và kiểu đột biến gene EGFR với ngưỡng phát hiện độ nhạy kỹ thuật là 0 1-1 và độ đặc hiệu là 100 . Từ khóa UTP UTPKTBN EGFR VEGF PCR đa mồi. ESTABLISHING ASSAYS FOR GENOTYPING VEGF AND IDENTIFYING EGFR MUTATIONS APPLYING FOR TARGET .