tailieunhanh - Tạo dòng Escherichia coli biểu hiện Ribonuclease H tái tổ hợp từ Thermus thermophilus

Ribonuclease H thủy phân đặc hiệu liên kết phosphodiester của phân tử lai RNA-DNA. Thermus thermophilus RNase H được biểu hiện quá mức trong Escherichia coli dưới dạng protein tái tổ hợp sẽ tạo ra nguồn cung cấp enzym RNase H thể hiện được hoạt tính ở nhiệt độ cao và ít bị biến tính hay bất hoạt trong các điều kiện cực đoan. Tạo dòng Escherichia coli tái tổ hợp biểu hiện Ribonuclease H có nguồn gốc từ Thermus thermophilus. | Nghiên cứu Y Học TP. Hồ Chí Minh Tập 25 Số 2 2021 TẠO NG ESCHERICHIA COLI I U HIỆN I ONUCL H TÁI TỔ HỢP T THERMUS THERMOPHILUS Nguyễn Thị Linh Giang1 Phạ Nguyên Hoàng1 Hà Vi1 Vũ Thanh Thảo1 Trần Cát Đông1 TÓM TẮT Đặt vấn đề Ribonuclease H thủy phân đặc hiệu liên kết phosphodiester của phân tử lai RNA-DNA. Thermus thermophilus RNase H được biểu hiện uá mức trong Escherichia coli dưới dạng protein tái tổ hợp sẽ tạo ra nguồn cung cấp enzym RNase H thể hiện được hoạt tính ở nhiệt độ cao và ít bị biến tính hay bất hoạt trong các điều kiện cực đoan. Mục tiêu Tạo dòng Escherichia coli tái tổ hợp biểu hiện Ribonuclease H có nguồn gốc từ Thermus thermophilus. Đối tượng và Phương pháp nghiên cứu Plasmid được cấu trúc từ plasmid pET28b và đoạn gen RiboH từ Thermus thermophilus và biến nạp plasmid vào E. coli. Ribonuclease H được thu nhận và tinh chế bằng sắc kí trao đổi cation ua cột SP-sepharose. Kết quả Tạo dòng thành công chủng E. coli BL21 DE3 chứa plasmid được cảm ứng biểu hiện Ribonuclease H bằng IPTG. Lượng Ribonuclease H thu nhận được sau tinh chế bằng sắc ký trao đổi cation là 33 8 mg L dịch nuôi cấy. Hoạt tính thủy phân liên kết phosphodiester của RNase H tái tổ hợp được kiểm tra bằng cách ủ với phân tử lai RNA-DNA và kiểm tra sản phẩm cắt bằng điện di trên gel agarose. Kết luận Chủng E. coli mang plasmid tái tổ hợp có khả năng biểu hiện Ribonuclease H thể hiện được hoạt tính thủy phân đặc hiệu liên kết phosphodiester của phân tử lai RNA-DNA. Từ khóa Ribonuclease H Thermus thermophilus tái tổ hợp E. coli BL21 DE3 ABSTRACT CLONING AND EXPRESSION OF THERMUS THERMOPHILUS RIBONUCLEASE H IN ESCHERICHIA COLI Nguyen Thi Linh Giang Pham Nguyen Hoang Ha Vi Vu Thanh Thao Tran Cat Dong Ho Chi Minh City Journal of Medicine Vol. 25 - No. 2 - 2021 56 - 63 Background Ribonuclease H is an endoribonuclease that specifically hydrolyzes the phosphodiester bond of RNA-DNA hybrids. Thermus thermophilus RNase H was overexpressed in E. coli as a recombinant protein .