tailieunhanh - Tạo kháng huyết thanh đa dòng bằng protein vỏ tái tổ hợp của Passiflora mottle virus nhiễm trên cây chanh leo tại Việt Nam

Mục tiêu của nghiên cứu là tạo được kháng huyết thanh đa dòng thỏ chẩn đoán Passiflora mottle virus (PaMoV), một potyvirus mới (chi Potyvirus, họ Potyviridae) hại chanh leo, được phát hiện và đặt tên đầu tiên tại Việt Nam. Toàn bộ gen mã hóa protein vỏ (coat protein, CP) của PaMoV đã được dòng hóa trên vector pET28a và được đánh giá biểu hiện trong chủng vi khuẩn Escherichia coli (E. coli) Rosetta (DE3). | Vietnam J. Agri. Sci. 2021 Vol. 19 195-205 Tạp chí Khoa học Nông nghiệp Việt Nam 2021 19 2 195-205 TẠO KHÁNG HUYẾT THANH ĐA DÒNG BẰNG PROTEIN VỎ TÁI TỔ HỢP CỦA Passiflora mottle virus NHIỄM TRÊN CÂY CHANH LEO TẠI VIỆT NAM Hà Viết Cường Lê Thị Tuyết Trần Nguyễn Hà Nguyễn Đức Huy Đỗ Tấn Dũng Khoa Nông học Học viện Nông nghiệp Việt Nam Tác giả liên hệ hvcuongnh@ Ngày nhận bài Ngày chấp nhận đăng TÓM TẮT Mục tiêu của nghiên cứu là tạo được kháng huyết thanh đa dòng thỏ chẩn đoán Passiflora mottle virus PaMoV một potyvirus mới chi Potyvirus họ Potyviridae hại chanh leo được phát hiện và đặt tên đầu tiên tại Việt Nam. Toàn bộ gen mã hóa protein vỏ coat protein CP của PaMoV đã được dòng hóa trên vector pET28a và được đánh giá biểu hiện trong chủng vi khuẩn Escherichia coli E. coli Rosetta DE3 . Protein CP tái tổ hợp của PaMoV ở điều kiện biến tính đã được gây miễn dịch trên thỏ. Hiệu giá và tính đặc hiệu của kháng huyết thanh KHT thỏ đã được đánh giá bằng các thử nghiệm chấm thấm miễn dịch Dot-Immunobinding Assay DIBA và miễn dịch liên kết enzyme kiểu bẫy kháng nguyên trước Plate Trapped Antigen Enzyme Linked Immunosorbent Assay PTA-ELISA . Kết quả các thí nghiệm cho thấy i Rosetta DE3 là chủng ký chủ thích hợp để biểu hiện protein CP của PaMoV ii KHT thỏ không phản ứng với dịch cây chanh leo khỏe và phát hiện PaMoV dễ dàng trong mẫu lá chanh leo bằng thử nghiệm DIBA và PTA-ELISA và iv KHT cũng phản ứng với Telosma mosaic virus TelMV và East Asian passiflora virus-IB EAPV-IB hai potyvirus đang nhiễm trên chanh leo tại Việt Nam. Từ khóa Passiflora mottle virus potyvirus DIBA ELISA passion fruit Vietnam Production of Polyclonal Antiserum using Recombinant Coat Protein of Passiflora mottle virus Infecting Passion Fruit in Vietnam ABSTRACT The major aim of this work was to produce polyclonal antibodies for diagnosis of Passiflora mottle virus PaMoV a putative novel potyvirus the genus Potyvirus the family Potyviridae .