Kinh doanh - Marketing
Kinh tế quản lý
Biểu mẫu - Văn bản
Tài chính - Ngân hàng
Công nghệ thông tin
Tiếng anh ngoại ngữ
Kĩ thuật công nghệ
Khoa học tự nhiên
Khoa học xã hội
Văn hóa nghệ thuật
Sức khỏe - Y tế
Văn bản luật
Nông Lâm Ngư
Kỹ năng mềm
Luận văn - Báo cáo
Giải trí - Thư giãn
Tài liệu phổ thông
Văn mẫu
Giới thiệu
Đăng ký
Đăng nhập
Tìm
Danh mục
Kinh doanh - Marketing
Kinh tế quản lý
Biểu mẫu - Văn bản
Tài chính - Ngân hàng
Công nghệ thông tin
Tiếng anh ngoại ngữ
Kĩ thuật công nghệ
Khoa học tự nhiên
Khoa học xã hội
Văn hóa nghệ thuật
Y tế sức khỏe
Văn bản luật
Nông lâm ngư
Kĩ năng mềm
Luận văn - Báo cáo
Giải trí - Thư giãn
Tài liệu phổ thông
Văn mẫu
Thông tin
Điều khoản sử dụng
Quy định bảo mật
Quy chế hoạt động
Chính sách bản quyền
Giới thiệu
Đăng ký
Đăng nhập
0
Trang chủ
Khoa Học Tự Nhiên
Sinh học
Phương pháp tách RNA tổng số và mRNA
Đang chuẩn bị liên kết để tải về tài liệu:
Phương pháp tách RNA tổng số và mRNA
Thúy Liễu
88
6
pdf
Đang chuẩn bị nút TẢI XUỐNG, xin hãy chờ
Tải xuống
Tách RNA tổng số RNA được tiến hành chiết tách gồm các bước cơ bản tương tự như DNA (bao gồm phá vỡ màng tế bào, loại protein, tủa RNA) nhưng ở đây ta dùng enzyme desoxyribonuclease (DNase) để phân huỷ DNA. Do RNA kém bền và dể bị phân huỷ bởi enzyme ribonuclease (RNase) có nhiều ở khắp nơi, hoạt tính cao lại bền với nhiệt (trên 90°C), vì vậy, điều kiện thao tác để chiết tách phải được tiến hành trong môi trường vô cùng nghiêm ngặt. . | Phương pháp tách RNA tổng số và mRNA Tách RNA tổng số RNA được tiến hành chiết tách gồm các bước cơ bản tương tự như DNA bao gồm phá vỡ màng tế bào loại protein tủa RNA nhưng ở đây ta dùng enzyme desoxyribonuclease DNase để phân huỷ DNA. Do RNA kém bền và dể bị phân huỷ bởi enzyme ribonuclease RNase có nhiều ở khắp nơi hoạt tính cao lại bền với nhiệt trên 90 C vì vậy điều kiện thao tác để chiết tách phải được tiến hành trong môi trường vô cùng nghiêm ngặt. Phương pháp chung để tách RNA tổng số được tiến hành như sau - Tế bào được nghiền với chất tẩy rửa SDS sarcocyl nồng độ cao nitơ lỏng để biến tính protein. Đồng thời mẫu cũng được nghiền với chất khử 2-mercaptoethanol để ức chế RNase. Nước sử dụng cũng được xử lý với DEPC Diethylpyrocarbonat cũng để loại bỏ RNase. - Các protein DNA được loại bỏ qua xử lý mẫu với hỗn hợp dung môi Trizol phenol pH 4 guanidinium thiocyanate glycerol sodium acetate khi ly tâm ta tách được RNA trong pha nước. DNA ở pH 4 bị hấp phụ vào pha dưới cùng với phenol protein biến tính nằm giữa hai pha cũng bị loại cùng với DNA cùng với pha phenol. RNA trong pha nước được hút ra sau đó tủa bằng izopropanol để -20 C li tâm và rửa lại bàng ethalnol 79 thu hồi RNA tinh khiết bảo quản lạnh để làm các thí nghiệm tiếp theo. Chất lượng của RNA tổng số được đánh giá sơ bộ qua điện di trên gel agarose. Tách từng loại RNA khác nhau Dựa vào kích thước trọng lượng phân tử người ta có thể tiến hành sắc kí điện di hoặc ly tâm để tách từng loại RNA. Phương pháp tách mRNA Do kích thước bé lại chiếm lượng nhỏ R 5 RNA tổng số có cấu trúc đa dạng nên không thể tách bằng phương pháp trên. Nhờ đặc điểm mRNA có đuôi polyA do đó người ta tách mRNA ra khỏi mẫu bằng phương pháp sắc ký ái lực oligodt-xenlulose. Ngày nay trên thị trường có loại viên bi từ trên bề mặt có gắn oligodt. Sau khi mRNA bám trên bề mặt các viên bi từ thông qua liên kết bổ sung với oligodt các viên bi này thu nhận và đem ly tâm ta thu được mRNA tinh khiết. Lưu ý rằng để tách mRNA người ta đi từ
TÀI LIỆU LIÊN QUAN
Nghiên cứu phương pháp hòa tách khuấy trộn để xử lý quặng urani vùng Pà Lừa - Pà Rồng, so sánh với phương pháp hòa tách đống
Bài giảng Các phương pháp tách - chiết
Bài giảng Thu gom, xử lý, vận chuyển, tàng trữ dầu, khí, nước - ThS Nguyễn Khắc Long
Giáo án mầm non: Tách 8 đối tượng thành 2 nhóm
Luận văn: Nghiên cứu tách thu hồi thuốc nhuộm dư trong nước thải nhuộm bằng màng lọc và khả năng giảm thiểu fouling cho quá trình lọc tách thuốc nhuộm qua màng - Cù Thị Vân Anh
Bài 13 - Thực hành: Tách chiết sắc tố từ lá và tách các nhóm sắc tố bằng phương pháp hóa học
Sử dụng rơm làm nguyên liệu cho công nghiệp giấy theo phương pháp hóa cơ kết hợp tách lignin
Một phương pháp mới tách chiết fucoidan từ rong nâu
Nghiên cứu công nghệ xử lý quặng urani có hàm lượng U≥0,1% bằng phương pháp hòa tách tĩnh
Luận văn: Khảo sát – Nghiên cứu phương pháp tách Phycocyanin trong tảo Spirulina
crossorigin="anonymous">
Đã phát hiện trình chặn quảng cáo AdBlock
Trang web này phụ thuộc vào doanh thu từ số lần hiển thị quảng cáo để tồn tại. Vui lòng tắt trình chặn quảng cáo của bạn hoặc tạm dừng tính năng chặn quảng cáo cho trang web này.