tailieunhanh - Ebook Phương pháp cơ bản trong nghiên cứu công nghệ sinh học: Phần 2 - NXB Nông nghiệp

Ebook "Phương pháp cơ bản trong nghiên cứu công nghệ sinh học" trình bày công nghệ sinh học giúp cải tiến cây trồng và vật nuôi thông qua các phương pháp phân tích genome, xác định vị trí của marker liên kết với gen. Thông qua các bước trên chúng ta phải nắm vững các nguyên lý cơ bản của định luật Mendel trong di truyền,. Phần 2 bắt đầu từ bài 16 là các phương pháp phân tích SSR, kỹ thuật gen trong cây trồng. . | 16. PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH SSR . Khái niệm Microsatellite là chuỗi mã di truyền lặp lại rất đơn gián thường xáy ra một cách ngẫu nhiên trong hâu hết genomic trên thực vật. SSR được viết tắt từ chữ simple sequence repeat . Chiều dài thường 1-100 bp. Do đó SSR có thế khuyếch đại trong ông nghiệm băng phương pháp PCR với phát triến cúa primer theo miền cúa hai bên chuỗi ký tự lặp lại trên một locus. Kỹ thuật ứng dụng SSR ré tiền hơn kỹ thuật RFLP. Do đó hiện nay các nhà nghiên cứu tiếp tục dụng SSR thiết kế bán đồ gen trong di truyền chọn lọc giông bằng SSR da dạng hóa về các vật liệu di truyền. Phăn ứng PCR cho SSR Giông như phương pháp RAPD một phán ting PCR cho SSR bao gồm các thành phần sau 1. Một dungdich gọi là buffer chứa Tris-HCl KCỈ và MgCl 2. Bon deoxynucleotide dNTPs 3. Hai oligonucleotide primers 4. DNA 5. Một DNA polymerase Thế tích cần cho một PCR cúa SSR có thế là 15-50pl là đú. DNA có thể ly trích tử nhiều phương pháp khác nhau. Tuy nhiên trước khi dùng DNA điều quan trọng là phái kiếm tra nồng độ DNA về số lượng cũng như chất lượng. Nồng độ dùng cho SSR từ 30-25ng pl. Nếu nồng độ quá cao phái pha loãng trước khi sứ dụng. PCR dùng cho một phản ứng Thành phẩn Pha dung dịch Thể tích Nông độ sau cùng Ghi chú Hp PCR buffer 10X 2 IX dNTP ImM 2 lOOpM Primer forward 5pM 4 0 25pM Primer reverse 5pM 5 0 25pM Taq polymerase 5unit pl 2 5 unit 20pl DNA 25ng pl 1 25ng pl Tùy theo nồng độ DNA 63 . Phương pháp tiên hành Các bước tiến hành như sau 1. Các thành phần dung dịch dùng thường dặt trong tú lạnh -20 C hoặc -80 C 2. Ghi nhãn cấn thận trên ống nghiệm 0 5ml hoặc trên micro tap một loại đặc biệt dùng dế chạy mẫu PCR 3. Chuyến 10 0 pl cúa mẫu DNA vào ống nghiệm 4. Chuấn bị pha dung dịch 5. Trộn đều và ly tâm 6. Dùng pipette lấy 10 0pl cho mỗi phán LÍng trong ống nghiệm có chứa sẵn DNA 7. 1 ấy một giọt dầu mineral oil phú trên dung dịch dầu này làm tránh bốc hơi dung dịch 8. Ly tâm 9. Đặt ống nghiệm vào máy PCR đậy nắp máy và khới hành cho máy hoạt

TÀI LIỆU LIÊN QUAN
TỪ KHÓA LIÊN QUAN
crossorigin="anonymous">
Đã phát hiện trình chặn quảng cáo AdBlock
Trang web này phụ thuộc vào doanh thu từ số lần hiển thị quảng cáo để tồn tại. Vui lòng tắt trình chặn quảng cáo của bạn hoặc tạm dừng tính năng chặn quảng cáo cho trang web này.