tailieunhanh - Đánh giá ảnh hưởng của một số amino acid vùng liên kết cơ chất đến hoạt tính B-Galactosidase từ Bacillus subtilis G1

Trong bài báo này, tác giả sử dụng phương pháp tạo đột biến điểm suy biến để đánh giá ảnh hưởng của một số amino acid tham gia liên kết trực tiếp với cơ chất trong quá trình thủy phân, cũng như để chọn lọc được đột biến có hoạt tính cao để có thể ứng dụng trong công nghiệp. | J. Sci. Devel. Vol. 11 No. 6 850-856 Tạp chí Khoa học và Phát triển 2013 tập 11 số 6 850-856 ĐÁNH GIÁ ẢNH HƯỚNG CỦA MỘT SỐ AMINO ACID VÙNG LIÊN KẾT CƠ CHẤT ĐẾN HOẠT TÍNH P-GALACTOSIDASE TỪ BACILLUS SUBTILIS G1 Nguyễn Thị Hồng Nhung2 Nguyễn Thị Thảo1 Vũ Văn Hạnh1 Quyền Đình Thi1 Vũ Đình Hòa3 Nguyễn Hữu Đức2 1 Viện Công nghệ sinh học Viện Hàn lâm Khoa học và Công nghệ Việt Nam 2Khoa công nghệ sinh học 3Khoa Nông học Trường Đại học Nông nghiệp Hà Nội Email quyen@ Ngày gửi bài Ngày chấp nhận TÓM TẮT P-Galactosidase từ Bacillus subtilis G1 LacA được mã hóa bởi gene lacA có mã số EU585783 trên Genbank là enzyme tham gia xúc tác cho phản ứng thủy phân đường lactose trong sữa. Tuy nhiên hoạt tính của LacA còn thấp. Vì vậy chúng tôi tiến hành tạo đột biến điểm suy biến tại môt số vị trí amino acid ttham gia liên kết trực tiếp với cơ chất trong quá trình thủy phân để đánh giá vai trò của một số amino acid tới hoạt tính enzyme và mục đích xa hơn là tìm được dòng có hoạt tính cao để ứng dụng vào sản xuất. Trong bài báo này chúng tôi đã sử dụng thông tin mô hình enzyme trên Swiss-Prot và xác định được 7 vị trí amino acid được dự đoán là liên kết trực tiếp với cơ chất của LacA là Arg120 Asn158 Trp331 Glu371 Lys372 Leu373 His374. Kết quả sàng lọc hoạt tính ban đầu của 7 thư viện đột biến cho thấy các vị trí này đều tác động đến hoạt tính enzyme với cơ chất ONPG. Phần lớn các sự thay thế amino acid đều làm giảm mạnh hoạt tính enzyme. Trong đó vị trí Arg120 có đến 99 66 các dòng giảm và mất hoat tính cho thấy Arg120 có thể đóng vai trò quan trọng trong vùng liên kết cơ chất. Các đột biến Arg120Phe Arg120Thr và Arg120Val đã làm mất hoạt tính thủy phân của LacA. Từ khóa Bacillus subtilis G1 P-Galactosidase đột biến điểm suy biến. Effect of Amino Acids of Substrate Binding Sites on P-galactosidase Activity from Bacillus subtilis G1 ABSTRACT P-Galactosidase LacA encoded by lacA gene from Bacillus subtilis G1 Acession No EU585783 is a .