tailieunhanh - Nghiên cứu phát triển hệ thống sắc kí miễn dịch cạnh tranh phát hiện nhanh các độc tố ruột tụ cầu trong sữa

Trong nghiên cứu này, các tác giả nghiên cứu chế tạo que thử phát hiện nhanh đồng thời năm loại độc tố ruột tụ cầu thường gặp là SEA, SEB, SEC1, SED và SEE trong sữa dựa trên kỹ thuật sắc ký miễn dịch cạnh tranh sử dụng kháng thể đa dòng IgY do chúng tôi tự sản xuất. Ưu điểm cơ bản của kháng thể IgY so với IgG là có thể sản xuất với liều lượng lớn, giá thành rẻ và đặc biệt là không có phản ứng với protein A | Tạp chí Khoa học ĐHQGHN Khoa học Tự nhiên và Công nghệ Tập 31 Số 1 2015 23-31 Nghiên cứu phát triển hệ thống sắc kí miễn dịch cạnh tranh phát hiện nhanh các độc tố ruột tụ cầu trong sữa Trần Thị Sao Mai1 Nguyễn Thị Khánh Trâm2 Lê Quang Hòa3 1Trường Đại học Kỹ thuật Y tế Hải Dương 2Viện Dinh dưỡng Quốc gia 3 Viện Công Nghệ Sinh học và Công Nghệ Thực Phẩm Trường Đại học Bách Khoa Hà Nội Nhận ngày 8 tháng 01 năm 2015 Chỉnh sửa ngày 22 tháng 01 năm 2015 Chấp nhận đăng ngày 20 tháng 3 năm 2015 Tóm tắt Các độc tố ruột của tụ cầu là một trong những nguyên nhân chủ yếu gây ngộ độc thực phẩm trên thế giới. Mục tiêu của nghiên cứu này là tạo que thử phát hiện nhanh và đồng thời các độc tố ruột tụ cầu thường gặp bao gồm SEA SEB SEC1 SED và SEE trong sữa dựa vào kỹ thuật sắc ký miễn dịch cạnh tranh. Để đạt mục tiêu này độc tố ruột tụ cầu SEC1 được sản xuất và tinh sạch bằng con đường tái tổ hợp và sau đó được cố định lên hạt nano cac bon để tạo cộng hợp phát hiện. Bên cạnh đó kháng thể đa dòng IgY kháng các độc tố ruột tụ cầu SEA SEB SEC1 SED và SEE và IgY kháng Bovine serum albumin BSA cũng được tạo ra và tinh sạch trước khi được in lên vạch thử nghiệm và vạch kiểm chứng của que thử sắc ký miễn dịch cạnh tranh. Các kết quả nghiên cứu về việc sản xuất SEC1 trong tế bào Escherichia coli BL21 đã chỉ ra rằng điều kiện thích hợp để thu nhận độc tố này là nuôi lắc 150 vòng phút ở 30oC nồng độ chất cảm ứng isopropyl P-D-1-thiogalactopyranoside IPTG là 0 5 mM thời gian cảm ứng là 8 giờ. Các thông số thích hợp để tạo que thử cũng đã được xác định là lượng kháng thể IgY kháng các độc tố ruột tụ cầu SEA SEB SEC1 SED và SEE cần cố định tại vạch thử nghiệm là 0 6 pg que thử có độ rộng 4 mm lượng kháng nguyên cộng hợp cần sử dụng là 2 pl. Ngưỡng phát hiện của que thử đối với các độc tố SEA SEB và SED trong sữa là 30 ng ml đối với SEC1 và SEE là 9 ng ml. Toàn bộ thời gian phân tích diễn ra trong 30 phút. Từ khóa Độc tố ruột tụ cầu kỹ thuật sắc ký miễn dịch sữa que thử. 1. Đặt vấn đề Nguyên