tailieunhanh - Hoàn thiện quy trình chuyển gen cho giống lúa Taichung 65 thông qua vi khuẩn Agrobacterium tumefaciens

Trong nghiên cứu này, các tác giả đã cải tiến thành công quy trình chuyển gen vào giống lúa Taichung 65 thông qua vi khuẩn Agrobacterium tumefaciens với hiệu suất chuyển gen cao, thao tác đơn giản, giảm thiểu khối lượng công việc phải làm. | J. Sci. Devel. 2015 Vol. 13 No. 5 764-773 Tạp chí Khoa học và Phát triển 2015 tập 13 số 5 764-773 HOÀN THIỆN QUY TRÌNH CHUYỂN GEN CHO GIỐNG LÚA TAICHUNG 65 THÔNG QUA VI KHUẨN Agrobacterium tumefaciens 1 1 Ấí 3 Hoàng Thị Giang Mai Đức Chung Nguyễn Thị Huê Jérémy Lavarenne Mathieu Gonin3 Nguyễn Thanh Hải2 Đỗ Năng Vịnh1 Pascal Gantet3 1Viện Di truyền Nông nghiệp Việt Nam 2Khoa Công nghệ sinh học Học viện Nông nghiệp Việt Nam 3IRD UMR DiAdE LMI rice Email nuocngamos@ Ngày gửi bài Ngày chấp nhận TÓM TẮT Trong nghiên cứu này chúng tôi đã cải tiến thành công quy trình chuyển gen vào giống lúa Taichung 65 thông qua vi khuẩn Agrobacterium tumefaciens với hiệu suất chuyển gen cao thao tác đơn giản giảm thiểu khối lượng công việc phải làm. Trong quy trình đưa ra chúng tôi đã tối ưu hóa các bước tiến hành chuẩn hóa thành phần môi trường nuôi cấy và đưa ra một số nhân tố quan trọng trong thao tác. Kết quả thí nghiệm cho thấy sử dụng đĩa petri có gờ cao 15mm và phơi mẫu không chỉ làm tăng tỷ lệ tạo mô sẹo từ phôi mà còn tăng kích thước và chất lượng mô sẹo dùng cho quá trình chuyển gen. Dịch khuẩn với mật độ OD600nm 0 1 là tối ưu với tần số biểu hiện gen GUS ở mô sẹo cao 81 25 và tỷ lệ mẫu nhiễm thấp. Ở giai đoạn chọn lọc sau lây nhiễm mô sẹo phát triển tốt hơn khi tiến hành phơi mẫu và sử dụng đĩa petri có gờ cao 15mm. Phân tích sự có mặt của promoter R4 cho thấy tỷ lệ cây tái sinh mang cấu trúc gen biến nạp cao 90 24 . Đánh giá sự biểu hiện của gen GUS ở cây lúa chuyển gen đã chứng tỏ sự hoạt động mạnh của promoter R4 điều khiển quá trình phiên mã dẫn tới tổng hợp enzym GUS. Kết quả phân tích cây chuyển gen ở thế hệ T1 đã chứng minh sự di truyền ổn định của gen biến nạp sang thế hệ sau. Từ khóa Agrobacterium callus phôi hóa chuyển gen japonica lúa Taichung 65. Optimization of Transformation Protocol for Japonica Rice 65 through Agrobacterium tumefaciens ABSTRACT In the present study we have successfully developed a .