tailieunhanh - Các phương pháp lai phân tử

Phương pháp Southern blot Phương pháp Southern blot được E. Southern phát minh vào năm 1975, cho phép nghiên cứu DNA của bộ gen, kiểm tra kết quả chuyển gen hoặc kiểm tra sự có mặt của một gen nào đó trong bộ gen của tế bào. Để thực hiện được quá trình lai, đầu tiên, người ta phải tách DNA bộ gen của tế bào. | Các phương pháp lai phân tử 1. Phương pháp Southern blot Phương pháp Southern blot được E. Southern phát minh vào năm 1975 cho phép nghiên cứu DNA của bộ gen kiểm tra kết quả chuyển gen hoặc kiểm tra sự có mặt của một gen nào đó trong bộ gen của tế bào. Để thực hiện được quá trình lai đầu tiên người ta phải tách DNA bộ gen của tế bào. Sử dụng enzyme cắt giới hạn để cắt phân tử DNA thành những đoạn nhỏ điện di trên gel agarose để tách những đoạn có kích thước khác nhau. Gây biến tính DNA trên gel bằng dung dịch NaOH-0 5M sau đó chuyển DNA từ gel sang màng lai nitrocellulose . Trong quá trình chuyển vị trí của DNA phải được giữ nguyên. DNA cố định trên màng được lai với mẫu dò có đánh dấu phóng xạ ở nhiệt độ 65 C và thời gian lai khoảng 3 8 giờ. Sau quá trình lai người ta rửa màng lai để loại bỏ những mẫu dò không bắt cặp chuyên biệt với DNA cố định trên màng lai. 1 Dung dịch đệm 2 Gía đỡ 3 Bấc giày lọc 4 Gel agarose 5 Màng lai 6 Giấy thấm 7 Tấm kính 8 Vật nặng Kỹ thuật chuyển DNA từ gel agarose lên màng lai Cuối cùng người ta dùng kĩ thuật phóng xạ tự ghi để định vị các phân tử lai. Trong kĩ thuật này người ta đặt một phim nhạy cảm với tia xạ áp sát vào màng lai. Các phân tử lai có đánh dấu phóng xạ sẽ tác động lên phim và kết quả được thể hiện qua các chấm đen trên phim. Các ứng dụng quan trọng của Sourthern blot - Lập bản đồ giới hạn của một gen. - Phát hiện các đa dạng trình tự của cùng một gen ở các chủng hay các cá thể khác nhau qua sự so sánh bản đồ giới hạn của chúng. - Phát hiện các đột biến mất đoạn đột biến điểm hay tái tổ hợp trên một gen vì chúng làm thay đổi bản đồ giới hạn. 2. Phương pháp Northern blot Phương pháp lai Northern blot là phương pháp lai RNA của tế bào với mẫu dò DNA. Phương pháp này được sử dụng để xác định kích thước và hàm lượng của một mRNA đặc trưng trong một hỗn hợp RNA. Về nguyên tắc giống như lai Southern blot được tiến hành như sau RNA đã được làm biến tính sẽ được phân tích theo kích thước nhờ điện di .