tailieunhanh - Các loại enzim tổng hợp axit nuclêic

Enzyme sao chép một axit nucleic: Quá trình sao chép chuỗi axit nucleic tức là tổng hợp một chuỗi DNA hoặc RNA được tiến hành theo nguyên tắc bổ sung và đối song song. Việc thêm một nucleotide mới được tiến hành theo hướng 5’ → 3’. 1- Enzyme sao chép DNA → DNA Là các enzyme DNA-polymerase I, enzyme T4 DNA-polymerase, Taq polymerase tổng hợp chuỗi DNA từ một khuôn DNA hay còn gọi "enzyme phụ thuộc DNA". | Các loại enzim tổng hợp axit nuclêic Enzyme sao chép một axit nucleic Quá trình sao chép chuỗi axit nucleic tức là tổng hợp một chuỗi DNA hoặc RNA được tiến hành theo nguyên tắc bổ sung và đối song song. Việc thêm một nucleotide mới được tiến hành theo hướng 5 3 . 1- Enzyme sao chép DNA DNA Là các enzyme DNA-polymerase I enzyme T4 DNA-polymerase Taq polymerase tổng hợp chuỗi DNA từ một khuôn DNA hay còn gọi enzyme phụ thuộc DNA . Enzyme DNA - polymerase I Enzyme DNA-polymerase có nguồi gốc được tách từ vi khuẩn E. Coli chúng có ba hoạt tính - Hoạt tính tổng hợp DNA theo hướng 5 3 và sửa chữa trong sao chép - Hoạt tính exonuclease theo hướng 3 5 - Hoạt tính exonuclease theo hướng 5 3 . Ngày nay enzyme DNA-polymerase được dùng chủ yếu đê xác định trình tự DNA bằng phương pháp didesoxynucleotide của Sanger ngoài ra còn dùng để tổng hợp mẫu dò có độ phóng xạ cao hoặc xây dựng các vector từ DNA mạch đơn. Trong thực tế người ta hay sử dụng đoạn Klenow là sản phẩm thủy phân của enzyme DNA-polymerase I có hoạt tính exonuclease theo hướng 3 5 và hoạt tính tổng hợp. Enzyme T4 DNA - polymerase Có nguồn gốc từ phage T4 xâm nhiễm E. Coli có hoạt tính exonuclease theo hướng 3 5 . Enzyme này mạnh nên được sử dụng nhiều để tổng hợp mẫu dò có độ phóng xạ cao. Enzyme Taq - polymerase Trích li từ vi khuẩn Thermocellus aquaticus là enzyme chịu nhiệt cao có tác dụng khuyếch đại tổng hợp DNA. Enzyme này chủ yếu sử dụng để nhân dòng gen trong phản ứng PCR. 2- Enzyme phiên mã ngược Reverse transferase Là enzyme có khả năng sao chép bộ gen RNA của retrovirus khi ký sinh trong tế bào chủ tạo ra cDNA theo chiều 5 3 cần có mặt của mồi. Đây là giai đoạn cần thiết để tạo ra ngân hàng cDNA. Hiện nay trên thị trường enzyme phiên mã ngược có nguồn gốc từ AMV Avian Myeloblastosis Virus . Enzyme phiên mã ngược là một DNA-polymerase 5 3 có các đặc tính sau - Là enzyme phụ thuộc RNA - Tổng hợp DNA theo hướng 5 3 - Có hoạt tính RNase. Chúng được ứng dụng để thiết lập ngân hàng cDNA hoặc