tailieunhanh - Thí nghiệm đường cong sinh trưởng của tế bào thực vật

Nguyên liệu - Một dòng tế bào dịch huyền phù của thực vật sinh trưởng tốt. Phương thức sau đây dựa trên cơ sở nuôi cấy tế bào thuốc lá. Nếu chọn dòng tế bào khác thì cần thay đổi môi trường. - Hỗn hợp muối khoáng của Murashige-Skoog (1962) (Bảng ), 2,4dichlorophenoxyacetic acid (2,4-D), KH2PO4, inositol, , và sucrose để pha chế môi trường. | Thí nghiệm đường cong sinh trưởng của tế bào thực vật 1. Nguyên liệu - Một dòng tế bào dịch huyền phù của thực vật sinh trưởng tốt. Phương thức sau đây dựa trên cơ sở nuôi cấy tế bào thuốc lá. Nếu chọn dòng tế bào khác thì cần thay đổi môi trường. - Hỗn hợp muối khoáng của Murashige-Skoog 1962 Bảng 2 4-dichlorophenoxyacetic acid 2 4-D KH2PO4 inositol và sucrose để pha chế môi trường. - Hai bình tam giác 125 mL - Pipette loại miệng rộng vô trùng 10 mL - Tủ nuôi tế bào thực vật kèm máy lắc - Cân hóa chất - Ly tâm - Eppendorf tube 2. Phương thức tiến hành - Chuẩn bị môi trường muối khoáng của Murashige-Skoog 0 2 mg L 2 4-D 0 18 g L KH2PO4 0 1 g L inositol 1 mg L và 30 g L sucrose. Điều chỉnh pH tới 5 8 bằng KOH 1N và phân phối môi trường vào hai bình tam giác loại 125 mL sao cho mỗi bình tam giác chứa 30 mL. - Đậy nắp bình tam giác và khử trùng ở 121 oC trong 20 phút. - Cấy vào bình tam giác chứa 30 mL môi trường với 1 5 mL của dịch huyền phù tế bào 7 ngày tuổi và đặt trong tủ nuôi tế bào thực vật có máy lắc và lắc 150 vòng phút nhiệt độ nuôi 27oC chiếu sáng 8 giờ ngày ở cường độ lux. - Lấy 1 5 mL dịch nuôi cấy mỗi ngày đã được trộn kỹ và cho vào Eppendorf tube để cân ly tâm tube ở vòng phút trong 4-5 phút và loại thể nổi. Cân lại tube và tính toán phần trăm trọng lượng tế bào ẩm. Đặt tube trong tủ sấy ở 70oC trong hai ngày và cân lại để tính toán trọng lượng khô. - Vẽ đồ thị sự thay đổi nồng độ tế bào khô và tươi ẩm theo thời gian. Thí nghiệm đường cong sinh trưởng của nấm men Trong thí nghiệm này chủng nấm men sẽ được nuôi cấy trong bình tam giác thuỷ tinh và sự thay đổi nồng độ tế bào sẽ được kiểm soát bằng cách dùng ba kỹ thuật khác nhau đếm dưới kính hiển vi xác định khối lượng khô độ đục của dịch huyền phù tế bào. 1. Nguyên liệu - Một chủng nấm men bất kỳ sinh trưởng trong nuôi cấy dịch huyền phù. Chúng ta có thể thu chủng nấm men từ một phòng thí nghiệm vi sinh vật hoặc mua một chủng đặc biệt từ công ty. - Glucose dịch