tailieunhanh - Phương pháp tách dòng phân tử và xây dựng thư viện hệ gen

Tách dòng phân tử và xây dựng thư viện hệ gen Tách dòng phân tử (molecular cloning) là khái niệm chỉ một nhóm các phương pháp được sử dụng để: i) phân lập một một trình tự gen (ADN) đặc hiệu từ hỗn hợp các phân tử ADN ban đầu được tách chiết từ các mẫu sinh học vốn có cấu trúc phức tạp, kích thước lớn; và ii) khuếch đại (sao chép) trình tự lên một số lượng lớn đủ để có thể tiến hành phân tích về cấu trúc và chức năng của gen tương ứng | Tách dòng phân tử và xây dựng thư viện hệ gen Tách dòng phân tử molecular cloning là khái niệm chỉ một nhóm các phương pháp được sử dụng để i phân lập một một trình tự gen ADN đặc hiệu từ hỗn hợp các phân tử ADN ban đầu được tách chiết từ các mẫu sinh học vốn có cấu trúc phức tạp kích thước lớn và ii khuếch đại sao chép trình tự lên một số lượng lớn đủ để có thể tiến hành phân tích về cấu trúc và chức năng của gen tương ứng. Khả năng tinh sạch các đoạn gen ADN đặc hiệu có số lượng đủ lớn là cần thiết để có thể thao tác các đoạn gen đó vì các mục tiêu nghiên cứu khác nhau. Chẳng hạn từ các phân đoạn ADN được tách dòng người ta có thể tạo ra các phân tử ADN tái tổ hợp mang các phân đoạn ADN mang nguồn gốc khác nhau. Các phân tử ADN tái tổ hợp mới có thể làm thay đổi mức độ biểu hiện bình thường của một gen chẳng hạn bằng việc dung hợp giữa một trình tự mã hóa của một loài này với trình tự promoter của một loài khác hoặc thậm chí mã hóa tổng hợp một loại protein dung hợp mới protein lai mang các trình tự axit amin từ các protein có nguồn gốc khác nhau. Hiện nay các kỹ thuật tách dòng phân tử bao gồm cả PCR đã trở thành các công cụ thiết yếu trong nghiên cứu về sự điều hòa và biểu hiện của các gen và hệ gen ở các loài sinh vật khác nhau. Quá trình tách dòng ADN và tạo nên các phân tử ADN tái tổ hợp điển hình thường liên quan đến việc sử dụng các véctơ là trình tự mang thông tin điều khiển hoạt động nhân lên khuếch đại và hoặc biểu hiện trong tế bào của phân tử ADN tái tổ hợp mang đoạn ADN cài đoạn trình tự được phân lập bao gồm trình tự gen được quan tâm nghiên cứu. Các công cụ chính để tạo nên các phân tử ADN tái tổ hợp là các enzym giới hạn giúp cắt các phân tử ADN tại các vị trí xác định và các enzym nối cho phép ghép nối các phân đoạn ADN có nguồn gốc khác nhau với nhau. Bằng việc tạo nên các phân tử ADN tái tổ hợp có thể tự nhận lên trong tế bào chủ một đoạn ADN cài xác định nào đó có thể được phân lập tinh sạch và nhân lên thành một số lượng lớn các bản sao. Tiếp