tailieunhanh - Công nghệ ADN tái tổ hợp part 7

Phân tử ADN được coi là "cơ sở vật chất của tính di truyền ở cấp độ phân tử" (molecule of heredity). Tuy nhiên, thực chất về mặt cấu tạo, các ADN không phải một phân tử đơn thuần mà nó được tạo thành từ hai chuỗi polynucleotide, chúng liên kết với nhau và uốn quanh 1 trục tương tự 1 chiếc thang dây xoắn. Cấu trúc này được gọi là cấu trúc xoắn kép (double helix) | c ENZyM Giới H6N RESTRICTION ENDONUCLEASE Enzym giới hạn loại II được sử dụng chủ yếu vì nó cắt tại vị trí giới hạn. Thường cắt ở trình tự đọc theo chiều xuôi - ngược như nhau. Ví dụ Eco RI. 5 ế II II I I II 1 I II 1 I I I I I I I I I I I I I I I I I I 3 GAATTC GAATTC CTTAAG CTTAAG 3 I I I I I I I I I i I I I I I. I I I I 1 1 I I I I I I I ti Ir 5 KcpRI 5 Vrr I I I I 1 I I 11 I I I I rrrrrrrr M I 1 I I 1 3 G AATTC G AATTC CTTAA G CTTAA G 3 l j l I .1. I I I I I 1 I I 5 Phải chọn enzym giới hạn cắt ở hai đầu gen nhưng không cắt bên trong gen. ENZYM Giới H6N RESTRICTION ENDONUCLEASE Một số enzym giới hạn cắt trên mạch đơn. Tên enzym Trình tự nhận biết Dde I C TNAG Hae III GG CC Hga I GACGC N 5 Hha I GCG C Hinf I G ANTC Hin PI G CGC Mnl I CCTC N 7 Rsa I GT AC Taq I T CGA 38 Cflc ENZYM LÀN ĐÚT GfiY LIÊN KẾT PNOSPNODIESTE ENDONUCLEASE DNase I. Tách từ tuyến tụy bò phân hủy mối liên kết phosphodieste bên trong phân tử ADN mạch đơn tạo thành các đoạn oligonucleotit có đầu 5 -P và 3 -OH tự do. Ung dụng tạo ra các phân đoạn ADN hoặc véctơ đầu tù . Mungbean nuclease. Tách từ cây đậu đỗ phân hủy mối liên kết phosphodieste bên trong cả phân tử ADN và ARN. Với ADN mạch đơn có xu hướng cắt sau A và T tạo thành các đoạn oligonucleotit có đầu 5 -P và 3 -OH tự do. ứng dụng cắt gọt các plasmid gắn phân tử ADN vào đúng khung đọc theo đúng chiều mong muốn . .