tailieunhanh - Di truyền phân tử part 8

Tham khảo tài liệu 'di truyền phân tử part 8', tài liệu phổ thông, sinh học phục vụ nhu cầu học tập, nghiên cứu và làm việc hiệu quả | . TÓI ưu HÓA CÁC ĐIỀU KIỆN CHO PHẢN ỦNG PCR . Sequence cùa primer Thông thường người ta cẩn có primer vói chuỗi mã dài cổ 18 nucleotide trỏ lên áp dụng cho genome của những sinh vật thuộc eukaryote và primer ngắn - khoảng 10 nucleotide cho nhũng DNA được clone hóa như cosmiế. Tuy nhiên tùy theo loại primer tương hợp vói mục tiêu lựa chọn marker phân tủ ừong xét nghiệm PCR người ta có những primer của những marker có tính ngẫu nhiên như RAPD rất ngắn 10-16 mer hoặc STS marker cần primer có độ dài 20-24 mer Tuy nhiên chúng ta nên nhớ rằng DNA không phải là một chuỗi mã của những nucleotide một cách ngẫu nhiên mà nó còn có đặc tính của những họ gene families những nguyên tố có tính lập lại sự lập đoạn đơn giản hay những chuồi mã lập lại phức tạp thí dụ alpha satellite sequence của genome ngưòi . Tùy theo loài sinh vật và tùy theo cách thể hiện của sequence dây đơn đói lập template người ta sẽ thiết kế chuỗi mã của primer và kiểm tra chuỗi mã cẩn thận so vói số liệu lưu trữ trước đây nhằm loại trừ các sai sót về kỹ thuật. Gần đây người ta thường sử dụng phẩn mềm trong puter để thiết ké ra những primer theo mục tiêu nghiên cúu. . Nhiệt độ trong quá trình annealing Suggs và ctv. 1981 đã đề nghị một công thức để ưđc đoán nhiệt độ Td mà ỏ nhiệt độ ấy một nửa các primer sẽ được phản ứng annealing vói sequence mục tiêu. Công thức được sử dụng trong điều kiện primer có khoảng 20 oligonucleotide Td 4 G c 2 A T A T c G là số lượng các base có trong oligonucleotide. Tuy nhiên việc tính toán này chỉ có tính chất tạm thòi chúng ta phải điều chỉnh lại nhiệt độ này để có sự khuếch đại cao nhất và thu nhận tần suất đa hình cao nhât. Bằng kinh nghiệm và thực hiện xét nghiêm nhiều lần chúng ta mói có thể có số liệu đúng về nhiệt độ cho annealing. Sô base càng ít nhiệt độ này càng thấp và ngược lại. Hiện nay có những máy thermal cycler được thiết kế cho phép chúng ta đưa vào nhiều nghiệm thức Td để xác định nghiệm thức tối hảo. . Phản ứhg dung dịch đệm Một trong những