tailieunhanh - Bài 1. KỸ THUẬT CƠ BẢN VÀ PHA CHẾ MÔI TRƯỜNG NUÔI CẤY

b. Nút đậy Hấp khử trùng cùng với các dụng cụ thuỷ tinh 1210C, 1atm. Không khử trùng khô, gây cháy đối với nút bông và biến dạng với nút nhựa. c. Môi trường Bảng 2: Thời gian khử trùng dung dịch và các môi trường lỏng bằng nồi hấp (autoclave) ở 1210C, 1atm. Thể tích môi trường (ml) | Bài 1 . KỸ THUẬT CƠ BẢN VÀ PHA CHẾ MÔI TRƯỜNG NUÔI CẤY 1. KỸ THUẬT CƠ BẢN Kỹ thuật vô trùng a. Dụng cụ thuỷ tinh Bảng Thời gian khử trùng dụng cụ thuỷ tinh bằng nhiệt và nhiệt độ khử trùng Nhiệt độ oC Thời gian khử trùng phút 160 45 170 18 180 7 5 190 1 5 b. Nút đậy Hấp khử trùng cùng với các dụng cụ thuỷ tinh 1210C 1atm. Không khử trùng khô gây cháy đối với nút bông và biến dạng với nút nhựa. c. Môi trường Bảng 2 Thời gian khử trùng dung dịch và các môi trường lỏng bằng nồi hấp autoclave ở 1210C 1atm. Thể tích môi trường ml Thời gian hấp khử trùng phút 50 15 75 20 250-500 25 1000 30 1 Khử trùng mô thực vật Bảng 3 Hoá chất khử trùng nồng độ thời gian xử lý và hiệu quả thực nghiệm. Tác nhân vô trùng Nồng độ Thời gian xử lý phút Hiệu quả Calci hypochlorit 9 - 10 5 - 30 Rất tốt Natri hypochlorit 2 5 - 30 Rất tốt Hydro peroxid 10 - 12 5 - 15 Tốt Nước Brom 1-2 2 - 10 Rất tốt HgCl2 - 1 2 - 10 Trung bình Chất kháng sinh 4 - 50 mg l 30 - 60 Khá tốt Trong thời gian xử lý mô cấy phải ngập hoàn toàn trong dung dịch diệt khuẩn. Đối với các bộ phận có nhiều bụi cát trước khi xử lý nên rửa cẩn thận bằng nước xà phòng bột và rửa sạch lại bằng nước máy. Khi xử lý xong mô cấy được rửa nhiều lần bằng nước cất vô trùng tối thiểu là 3 lần . Khử trùng nơi thao tác cấy và dụng cụ cấy - Sàn và tường lau chùi thường xuyên trước khi đưa vào sử dụng phòng cấy cần được xử lý hơi formol. Đóng kín cửa phòng cấy trong 24h bỏ formaldehyde đi và khử hơi formaldehyde còn thừa bằng dung dịch NH3 25 cũng trong 24h. - Khử trùng trước tủ cấy bằng cách lau sạch bằng cồn 700. Bật đèn UV khử trùng phòng cấy 30 phút trước khi sử dụng. - Các dụng cụ mang vào phòng cấy đều vô trùng trước từ áo choàng mủ vải khẩu trang của người cấy đến dao kéo kẹp forceps giấy lọc bình đựng nước cất. - Trên bàn cấy thường xuyên có một đèn cồn để sử dụng trong khi cấy và một cốc đựng cồn 960 để nhúng các dụng cụ làm việc. 2 - Trước khi cấy người cấy cần rửa tay bằng xà phòng và lau kỹ đến khuỷ tay bằng .