tailieunhanh - Các enzyme sử dụng trong kỹ thuật tạo dòng

Được tìm thấy trong các loài vi khuẩn khác nhau là cac endonucalease có khả năng thủy giải DNA mạch đối ở những vị trí xác định. Vi khuẩn sử dụng restriction enzyme để bảo vệ chúng khoải các DNA ngoại lai. Vi khuẩn có một cơ chế để bảo vệ DNA của chúng khỏi hoạt động của các restriction enzyme của bản thân | Các enzyme sử dụng trong kỹ thuật tạo dòng 1. Restriction endonuclease 2. Các enzyme biến đổi DNA Nuclease ExonucleaseIII DNaseI nucleaseS1 DNA polymerase DNA Rtase RNA pol. Enzymes biến đổi đầu cuối DNA Polynucleotide kinase terminal trasferase 3. DNA ligase I. Các enzyme cắt giới hạn RE 1 -1. Nguồn gốc I - 2. Phân loại I1 I1 II. Kỹ thuật di truyền I -1. Vector tạo dòng I - 2. Tế bào chủ I - 3. Kỹ thuật tạo dòng . A. Chiến lược tạo dòng B. PCR J j 4. Thư viện gen A. Thư viện bộ gen I1 B. Thư viện cDNA 11 estriction Enzyme RE Được tìm thấy trong các loài vi khuẩn khác nhau là các endonuclease có khả năng thủy giải DNA mạch đôi ở những vị trí xác định Vi khuẩn sử dụng restriction enzyme để bảo vệ chúng khỏi các DNA ngoại lai Vi khuẩn có một cơ chế để bảo vệ DNA của chúng khỏi hoạt động của các restriction enzyme của bản thân. Các RE hợp thành hệ thống bảo vệ ở prokaryote chưa có hệ thống tương tự nào được phát hiện ở eukaryote. Chúng được phân lập và sử dụng cho các phòng thí nghiệm Vai trò sinh học của RE Hệ thống biến đổi giới hạn-restriction enzyme được hoạt động cùng với hệ thống methylase. Methylases là enzyme thêm nhóm methyl vào nucleotide chuyên biệt vào A hay C trong trình tự nhận biết recognition sequence . Sự methyl hóa ngăn chặn sự nhận biết của restriction enzyme. Do đó restriction enzyme trong một tế bào không phân cắt DNA của chính nó. Tuy nhiên restriction enzyme có thể phân cắt DNA ngoại lai xâm nhập vào trong tế bào như của bacteriophage. Restriction Endonucleases Loại I- có nhiều tiểu đơn vị có hoạt tính endonuclease và methylase cắt một cách ngẫu nhiên tại vị trí cách vị trí nhận biết recognition sequence 1000 bp Loại II- cắt DNA ngay vị trí nhận biết không cần ATP hầu hết ở dạng đơn phân Loại III- có nhiều tiểu đơn vị có hoạt tính endonuclease và methylase cắt cách 25 bp từ recognition sequence 1 Restriction Enzyme RE hoạt động như thế nào Restriction enzyme endonulease cắt DNA tại trình tự đặc hiệu Những loại cầu nối nào bị RE cắt - Cầu .