tailieunhanh - XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG TWEEN 20 TRONG VẮCXIN VÀ SINH PHẨM

Dựa vào phản ứng của polyethoxylat trong thành phần của Tween 20 với amoni cobaltothiocyanat tạo thành hợp chất màu xanh lơ tan trong dicloromethan. Tiến hành Mẫu thử được điều chỉnh bằng nước cất để có nồng độ protein khoảng 100 µg/ml. Hút 1 ml mẫu thử vào ống nghiệm, thêm 5 ml ethanol 95% (TT), ly tâm 3500 vòng/phút trong 20 phút ở 20 oC. Chuyển nước nổi sang ống nghiệm khác, rửa tủa bằng 1 ml ethanol 95%(TT), chuyển nốt nước rửa tủa vào ống nghiệm. Đun cách thủy nước nổi thu được ở 80oC cho đến. | XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG TWEEN 20 TRONG VẮCXIN VÀ SINH PHẨM Nguyên lý Dựa vào phản ứng của polyethoxylat trong thành phần của Tween 20 với amoni cobaltothiocyanat tạo thành hợp chất màu xanh lơ tan trong dicloromethan. Tiến hành Mẫu thử được điều chỉnh bằng nước cất để có nồng độ protein khoảng 100 pg ml. Hút 1 ml mẫu thử vào ống nghiệm thêm 5 ml ethanol 95 TT ly tâm 3500 vòng phút trong 20 phút ở 20 oC. Chuyển nước nổi sang ống nghiệm khác rửa tủa bằng 1 ml ethanol 95 TT chuyển nốt nước rửa tủa vào ống nghiệm. Đun cách thủy nước nổi thu được ở 80oC cho đến khi còn lại khoảng 0 5 ml thêm 1 ml nước cất vào ống nghiệm. Hút dung dịch Tween 20 chuẩn 1 mg ml vào các ống nghiệm lần lượt theo thể tích 10 25 50 75 100 pl thêm nước cất vừa đủ 1 ml. Mẫu trắng là 1 ml nước cất. Thêm 2 ml dicloromethane TT vào mỗi ống nghiệm đựng mẫu trắng mẫu chuẩn mẫu thử. Thêm tiếp 3 ml amoni cobaltothiocyanat lắc kỹ để yên ở nhiệt độ phòng trong 90 phút. Hút bỏ nước nổi bằng máy hút chân không đo mật độ quang Phụ lục của lớp dichloromethan màu xanh lơ phía dưới ở bước sóng 620 nm. Dựng đường chuẩn từ đó tính ra hàm lượng Tween 20 trong mẫu thử. Đơn vị tính pg 100 pg protein. Cách pha các dung dịch - Dung dịch amoni cobaltothiocyanat Hòa tan 6 0 g cobalt nitrate TT và 40 g amoni thiocyanat TT trong nước cất thêm nước cất vừa đủ 200 ml lọc qua giấy lọc. - Dung dịch Tween 20 chuẩn 10 mg ml Cân 1g Tween 20 vào bình định mức 100 ml thêm nước cất vừa đủ lắc đều. Pha loãng bằng nước cất 10 lần trước khi dùng. Tiêu chuẩn chấp thuận Tùy từng loại vắc xin và sinh phẩm. Hàm lượng Tween 20 có trong bán thành phẩm viêm gan B không lớn hơn 50 pg 100 pg .