tailieunhanh - CƠ SỞ DI TRUYỀN CHỌN GIỐNG THỰC VẬT part 6

Phân lập gene có ích từ thể cho (DNA lạ) và nhân gene - Loại bỏ T-DNA khỏi Ti-plasmid của các dong vi khuẩn đã chọn lọc - Chuyền DNA lạ vào Ti-plasmid cùng với promotor và một gene chỉ thị có khả năng chọn lọc dễ dàng (ví dụ gene uidA của vi khuẩn mã hoá βglucuronidaza thường gọi là gene GUS, hay gene kháng kháng sinh). - Đưa plasmid đã biến đổi vào tế bào thực vật - Chọn tế bào được chuyển gene - Tái sinh tế bào được chuyển gene - Chọn cây biểu hiện. | 111 - Phân lập gene có ích từ thể cho DNA lạ và nhân gene - Loại bỏ T-DNA khỏi Ti-plasmid của các dong vi khuẩn đã chọn lọc - Chuyền DNA lạ vào Ti-plasmid cùng với promotor và một gene chỉ thị có khả năng chọn lọc dễ dàng ví dụ gene uidA của vi khuẩn mã hoá P-glucuronidaza thường gọi là gene GUS hay gene kháng kháng sinh . - Đưa plasmid đã biến đổi vào tế bào thực vật - Chọn tế bào được chuyển gene - Tái sinh tế bào được chuyển gene - Chọn cây biểu hiện được chuyển cấy chuyển gene Cách l từ hạt Đưa các phôi vào môi trường sinh trưởng Nhiễm sắc thể Cách ly gene độc từ tế bào Bt. Sửa đỏi để sử dụng trong pls và tạo ra nhiều bản sao Lớp vỏ áo hạt Phôi Tái sinh các cây mạ từ các mô sẹo phát triển từ phôi được biến nạp Máy bắn hạt Cây lúa chuyển gene V Phủ một lớp hạt vàng nhỏ lên gene Bt Băn các phôi với các tiểu hạt vàng có lồng gene Bt các tế bào cây lúa Cho các phôi sinh trưởng trên môi trường để xác định các phôi nào đã được biến nạp gene Bt Hình Tạo giống lúa Bt bằng phương pháp súng bắn gene particle bombardment method . Đây là một trong nhiều phương pháp có thể sử dụng để chuyển các gene mới sang cây lúa bằng kỹ thuật di truyền. Ở một số loài cây dễ nuôi cấy như khoai tây và cà chua các mẫu lá cắt 112 rời được nhúng vào dung dịch chứa vi khuẩn trong một thời gian ngắn. Sau đó các mẫu lá được đưa vào môi trường dinh dưỡng. Trong khoảng thời gian đó vi khuẩn tiếp tục sinh trưởng và xâm nhập vào các tế bào lá rồi tạo ra một số tế bào chuyển gene. Vì chỉ một phần nhỏ tế bào được chuyển gene nên cần phải tiến hành chọn lọc. Việc chọn lọc thông thường dựa vào gene chọn lọc đó là gene kháng kháng sinh hay kháng thuốc trừ cỏ. Sau đó các mẫu lá được chuyển vào môi trường khác chứa một chất kháng sinh để diệt Agrobacterium còn sót lại và một chất kháng sinh khác hay thuốc trừ cỏ để loại trừ các tế bào không chuyển gene. Các tế bào được chọn được chuyển sang một loạt các môi trường dinh dưỡng để tái sinh cây. Kết quả tái sinh và tạo cây chuyển gene phụ thuộc vào loài .