tailieunhanh - BÁO CÁO KHOA HỌC: "BIỂU HIỆN GEN LACZ MÃ HOÁ BETAGALACTOSIDAZA CỦA VI KHUẨN ESCHERICHIA COLI ATCC 11105 TRONG E. COLI BL21"

Xúc tác quá trình thuỷ phân galactosyl ở vị trí tận cùng của hydratcacbon, glycoprotein và galactolipit [1]. | BIỂU HIỆN GEN LACZ MÃ HOÁ BETA-GALACTOSIDAZA CỦA VI KHUẨN ESCHERICHIA COLI ATCC 11105 TRONG E. COLI BL21 Trần Minh Trí Nguyễn Thị Thanh Lịch Trương Nam Hải. Viện công nghệ Sinh học Trung tâm KHTN CNQG. Ngô Tiến Hiển Viện Công nghiệp thực phẩm. ĐẶT VẤN ĐỀ P-Galactosidaza P-D-galactosidase galactohydrolase xúc tác quá trình thuỷ phân galactosyl ở vị trí tận cùng của hydratcacbon glycoprotein và galactolipit 1 . P-Galactosidaza thuỷ phân cơ chất từ đầu không khử tại vị trí P-D-galactosyl tận cùng của P-D-galactosizit 2 3 để chuyển hóa lactoza thành galactoza và glucoza 3 4 . P-Galactosidaza có mặt phổ biến trong giới động vật thực vật nấm và vi sinh vật. Ở vi khuẩn cấu trúc và khối lượng phân tử của P-galactosidaza rất khác nhau. Enzym này có thể tồn tại dưới dạng một tiểu phần như P-galactosidaza của Thermus khối lượng phân tử 75 kDa và dạng nhiều tiểu phần như P-galactosidaza của T. aquaticus khối lượng phân tử lớn hơn 700 kDa . P-galactosidaza của E. coli tồn tại dưới dạng một protein gồm 4 tiểu phần giống nhau chức năng hoạt động của mỗi tiểu phần độc lập với nhau và có khối lượng phân tử là 116 353 kDa 2 . P-Galactosidaza được ứng dụng rộng rãi trong nhiều ngành công nghiệp. Trong công nghiệp thực phẩm P-galactosidaza được bổ sung vào quá trình lên men từ bơ sữa như kem sữa chua để tránh sự kết tinh lactoza. Trong quy trình sản xuất sữa P-galactosidaza được bổ sung để thuỷ phân lactoza làm tăng độ ngọt của sữa 1 4 . Trong ngành y học P-galactosidaza được điều chế làm thuốc trợ tiêu hoá 4 . Trong kỹ thuật ADN tái tổ hợp P-galactosidaza đóng vai trò dấu chuẩn trong quá trình tách và chọn dòng phân tử nhờ hiện tượng bất hoạt enzym trên các vectơ có chèn gen tái tổ hợp. Trong bài báo này chúng tôi sẽ trình bày các phương pháp đã tiến hành để tạo chủng vi khuẩn tái tổ hợp có khả năng tổng hợp P-galactosidaza cao. Gen lacZ từ chủng E. coli ATCC 11105 được nhân lên bằng kỹ thuật PCR và đưa vào vectơ biểu hiện pET-22b để tạo vectơ pET-22bLacZ. Sau đó .