tailieunhanh - Báo cáo khoa học: Bước đầu nghiên cứu đặc trưng cá thể người qua LOCUT D5S818 bằng kỹ thuật PCR

Sự ra đời của sinh học phân tử và công nghệ gen đã giúp cho khoa học hình sự, lập chứng minh thư ADN, truy tìm thủ phạm . được xác định nhanh chóng và chính xác. Trong hệ gen của con người tồn tại các locut di truyền có chứa các đoạn ADN lặp lại (4 đôi bazơ) khác nhau và được phát hiện bằng phương pháp PCR / 1,2,3,4 /. | BƯỚC ĐÀU NGHIÊN CỨU ĐẶC TRƯNG CÁ THỂ NGƯỜI QUA LOCUT D5S818 BẰNG KỸ THUẬT PCR Nghiêm Xuân Dũng Trần Minh Đôn Lương Thị Yến Lê Bích Trâm Cục kỹ thuật Hoá Sinh và Tài liệu TCVI BCA Ngô Thị Kim Quyền Đình Thi Đào Thị Tuyết Viện Công nghệ Sinh học MỞ ĐÀU Sự ra đời của sinh học phân tử và công nghệ gen đã giúp cho khoa học hình sự lập chứng minh thư ADN truy tìm thủ phạm . được xác định nhanh chóng và chính xác. Trong hệ gen của con người tồn tại các locut di truyền có chứa các đoạn ADN lặp lại 4 đôi bazơ khác nhau và được phát hiện bằng phương pháp PCR 1 2 3 4 . Trên thế giới đã có hơn 12 locut được sử dụng rộng rãi trong y học hình sự 5 6 . Ở Việt Nam Viện Khoa học hình sự đã áp dụng kỹ thuật phân tử trong điều tra phá án song các kỹ thuật trên được sử dụng toàn bộ chương trình và kit của nuớc ngoài. Để đáp ứng yêu cầu áp dụng kỹ thuật phân tích ADN của người Việt Nam đề tài sẽ dần khảo sát các đoạn gen phù hợp. Trong bài này chúng tôi xin được phép trình bày phương pháp khảo sát và đặc trưng cá thể người qua locut D5S818. ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU. 1. Đối tượng Mẫu máu được lấy từ tĩnh mạch người khoẻ mạnh tình nguyện và chống đông bằng EDTA. Các hoá chất dùng cho tách chiết và làm sạch ADN là hoá chất tinh khiết dùng cho phân tích được mua của Biorad Sigma. 2. Phương pháp ADN được tách chiết từ máu toàn phần theo phương pháp chuẩn dùng phenol và cloroform. ADN sau tách chiết được xác định độ sạch và hàm lượng bằng điện di trên gel agaroza 2 mật độ quang học ở bước sóng 260 280 nm và tỉ lệ giữa hai mật độ quang này là 1 7 - 2 2. Phản ứng PCR được tiến hành với tỉ lệ thích hợp các chất và cặp mồi D5 S818 xin phép chưa công bố trình tự mồi . Trình tự của phản ứng PCR như sau a. 95oC - 5 phút b. 94oC - 45 giây c. 57oC - 75 giây d. 72oC - 1 phút Quá trình từ b đến d được lặp lại 30 chu kỳ. - 6 phút - 10 phút Sản phẩm của phản ứng PCR được kiểm tra bằng phương pháp điện di trên gel agaroza 2 và gel polyacrylamid 5 có biến tính. Kích thước của sản .