tailieunhanh - Hóa Enzyme - Phân Tích Phân Tử Enzyme Phần 4

Phương pháp sắc ký trao đổi ion dựa vào sự khác nhau về điện tích tổng số của các protein enzyme. Hay nói cách khác, phương pháp này được dựa trên cơ sở của phản ứng trao đổi ion giữa protein được tan trong nước hoặc dung dịch đệm loãng và các tác nhân trao đổi ion. | 37 Phương pháp sắc ký trao đổi ion dựa vào sự khác nhau về điện tích tổng số của các protein enzyme. Hay nói cách khác phương pháp này được dựa trên cơ sở của phản ứng trao đổi ion giữa protein được tan trong nước hoặc dung dịch đệm loãng và các tác nhân trao đổi ion. Tác nhân hay nguyên liệu trao đổi ion có thể là chất nhựa có tích nhóm sinh ion hoặc là chất ionit. Đây là những chất giá trơ không tan trong nước có bản chất là cellulose hoặc chất gel dextran có lưới phân nhánh Sephadex Molselect hoặc là chất nhựa polystirol. Chất giá thể này thường kết hợp với các nhóm ion hóa. Các chất trao đổi ion có chất giá là cellulose sephadex molselect thông thường được dùng để tách protein enzyme còn các chất trao đổi ion có chất giá là polystirol ví dụ như Dowex Amberlite chỉ dùng để tách các peptid có trọng lượng phân tử nhỏ hơn. Các chất trao đổi ion có chất giá cellulose Cationit CM - cellulose carboxylmetyl - cellulose - là một dẫn xuất este của cellulose. Cellulose - O - CH2 - COOH. Khi phân li cho ra COO-. Đây là chất trao đổi cation. Trên những cationit thì các protein kiềm có thừa những nhóm amin và những nhóm kiềm khác được hấp phụ. Sự hấp phụ trên các cationit được tiến hành với những dung dịch loãng ở pH 1 5 -6 5. Các protein kiềm có chứa các amino acid diamino - mono carboxylic như lys Arg His Anionit DEAE - cellulose diethylamino - ethyl - cellulose là dẫn xuất este của cellulose. C2H5 Cellulose - O - CH2 - CH2 - N x x C2H5 Trong H2O nó được phân ly Cellulose - O - C2H4 - N - CJ E H2O C2H5 Cellulose - O - C2H4 - N . OH - I H C2H5 Đây là chất trao đổi anion Các anionit được áp dụng để phân tích các protein acid có thừa những nhóm carboxyl tự do. Sự hấp phụ protein trên những ionit như vậy 38 được tiến hành với những dung dịch đệm có lực ion thấp 0 005 - 0 1M ở pH 7 5 - 8 5 các protein acid có chứa các amino acid monoamin . Trong hỗn hợp chất ionit với dung dịch đệm có độ pH tương ứng các chất ionit đã nói ở trên trở nên tích điện . Vì vậy trên bề mặt lớp chất .