tailieunhanh - GIÁO TRÌNH : THỰC TẬP SINH HÓA part 8

Đậy kín và lắc đều các ống nghiệm, đem đun cách thủy đang sôi trong 30 phút. Sau đó làm nguội dung dịch rồi thêm vào mỗi ống nghiệm 2 mL thuốc thử orcinol. Lắc đều và tiếp tục đun cách thủy đang sôi 20 phút. Để nguội và đo độ hấp thụ ở bước sóng 670nm. Vẽ đồ thị tương quan giữa độ hấp thụ và nồng độ ARN. b. Chuẩn bị mẫu Tiến hành tương tự như các ống ARN chuẩn, nhưng thay vào đó là dung dịch ARN cần phân tích. . | Giáo Trình Thực Tập Sinh Hóa Ống nghiệm 1 2 3 4 5 6 7 Nồng độ ARN pg mL 0 50 100 200 300 400 500 Thể tích dd ARN gốc PL 0 40 80 160 240 320 400 Thể tích dd đệm mL 400 360 320 240 160 80 0 DD H2SO4 10 mL 1 6 1 6 1 6 1 6 1 6 1 6 1 6 Đậy kín và lắc đều các ống nghiệm đem đun cách thủy đang sôi trong 30 phút. Sau đó làm nguội dung dịch rồi thêm vào mỗi ống nghiệm 2 mL thuốc thử orcinol. Lắc đều và tiếp tục đun cách thủy đang sôi 20 phút. Để nguội và đo độ hấp thụ ở bước sóng 670nm. Vẽ đồ thị tương quan giữa độ hấp thụ và nồng độ ARN. b. Chuẩn bị mẫu Tiến hành tương tự như các ống ARN chuẩn nhưng thay vào đó là dung dịch ARN cần phân tích. Đem đo độ hấp thụ ở bước sóng 670nm. Từ kết quả độ hấp thụ đo được đối chiếu với đồ thị chuẩn ARN tính ra lượng ARN trong mẫu. 66 Giáo Trình Thực Tập Sinh Hóa CHƯƠNG 8. PHỤ CHƯƠNG . XÁC ĐỊNH ACID BÉO BẰNG SẮC KÝ KHÍ Sắc ký khí là một phương pháp nhanh và chính xác dùng để định tính và định lượng nhiều hợp chất dựa trên các chất chuẩn. Sau đây xin giới thiệu một phương pháp xác định acid béo bằng sắc ký khí. Dụng cụ và hóa chất - Máy sắc ký khí - Ống bơm mẫu syringe - Bếp đun cách thủy - Bình tam giác 100ml - Bình chiết 250ml - Phểu lọc - Giấy lọc - Máy cô quay chân không - KOH 0 5N - Boron trifluoride methanol - Hexan - N2SO4 Tiến hành Methyl hóa mẫu Cân 100g dầu thực vật trong bình tam giác 100 mL có nắp đậy ví dụ như dầu đậu phộng được trích bằng máy Soxhlet . Tiếp tục cho thêm 5 mL KOH 0 5N rồi đun cách thủy ở 800C trong 5 phút. Thêm vào 5ml hỗn hợp boron trifluoride methanol và tiếp tục đun cách thủy ở 800C trong 5 phút. Cho thêm 5 mL n-hexane và tiếp tục đun cách thủy ở 800C trong 1 phút. Thêm vào bình tam giác 50 mL hexane sẽ thu được một hỗn hợp phân lớp. Dùng bình chiết tách hai dung dịch trong hỗn hợp. Lớp dưới là dung dịch muối bão hòa. Lớp trên là dung dịch chứa acid béo trong hexane sẽ được dehydrate hóa bằng cách thêm vào một ít Na2SO4 rồi lọc bằng giấy lọc. Dung dịch lọc thu được sẽ được đem cô quay chân không rồi .