tailieunhanh - Luận văn: XÂY DỰNG PHƯƠNG PHÁP NHẬN DIỆN VÀ PHÂN TÍCH TÍNH ĐA DẠNG DI TRUYỀN CỦA 21 DÒNG CACAO (THEOBROMA CACAO L.) BẰNG KỸ THUẬT MICROSATELLITE part 2

điểm chính của 21 dòng cacao nghiên cứu trong đề tài Các dòng cacao nghiên cứu trong đế tài thuộc những giống có năng suất cao, có giá trị thương mại nhờ được chọn lọc từ những cây bố, mẹ có đặc tính tốt trong quá trình lai tạo giống. 13 dòng cacao thương mại được nhập từ Malaysia có đời bố mẹ của một số dòng như sau: Tên dòng TD1 TD3 TD5 TD10 TD13 TD14 TD12 Đời bố mẹ PA 35 x NA 32 Con lai của Trinitario UAWA 18 x NA 31 x PA 15. | 60 điểm chính của 21 dòng cacao nghiên cứu trong đề tài Các dòng cacao nghiên cứu trong đế tài thuộc những giống có năng suất cao có giá trị thương mại nhờ được chọn lọc từ những cây bố mẹ có đặc tính tốt trong quá trình lai tạo giống. 13 dòng cacao thương mại được nhập từ Malaysia có đời bố mẹ của một số dòng như sau Tên dòng Đời bố mẹ TD1 PA 35 x NA 32 TD3 Con lai của Trinitario TD5 UAWA 18 x TD10 NA 31 x PA 15 TD13 UIT 1 x NA 33 TD14 PA 173 x SCA 9 TD12 PA 76 x SCA 20 x UIT 1 x SCA 6 trình ly trích DNA ở tế bào thực vật Mọi nghiên cứu và ứng dụng sinh học phân tử đều bắt đầu bằng việc thu nhận một lượng lớn nucleic acid đủ lớn và đủ tinh sạch để tiến hành các thí nghiệm kế tiếp. Mối quan tâm hàng đầu của các kỹ thuật tách chiết nucleic acid là thu nhận được các phân tử này ở trạng thái nguyên vẹn tối đa không bị phân hủy bởi các tác nhân cơ học phân tử bị gẫy do nghiền lắc mạnh hay hóa học phân tử bị thủy giải bởi các enzyme nội bào giải phóng ra môi trường khi tế bào bị phá vỡ . Các nucleic acid cần được tách chiết ở nhiệt độ thấp để ức chế hoạt động của các enzyme nội bào Desoxyribonuclease-Dnase và Ribonuclease-Rnase Một qui trình ly trích DNA ở tế bào thực vật gồm 3 bước cơ bản Bước 1 Phá vỡ màng tế bào. Thông thường người ta nghiền tế bào hoặc mô trong một hỗn hợp dung dịch đệm chiết gồm Tris - HCl 1M pH NaCl 5M EDTA sodium dodecyl sulfat 10 SDS . Hỗn hợp này sẽ phá vỡ màng tế bào và màng nhân giải phóng DNA ra môi trường đồng thời phân hủy các protein liên kết với DNA. 61 Bước 2 Loại bỏ các thành phần không mong muốn trong mẫu chủ yếu là các protein. Có thể sử dụng CTAB NaCl CTAB Cetyltrimethylammonium bromide tạo phức hợp với polysaccharide và protein rồi kết tủa chúng. Loại bỏ protein và phức hợp CTAB - polysaccharide - protein bằng hỗn hợp phenol chloroform isoamyl alcohol 25 24 1 . Phenol và chloroform sẽ làm biến tính protein. Ngoài ra chloroform còn làm cho pha nước và pha hữu cơ dễ tách rời nhau. Isoamyl .