tailieunhanh - Luận văn : ĐÁNH GIÁ KHẢ NĂNG ĐÁP ỨNG MIỄN DỊCH ĐỐI VỚI PROTEIN MBP-VT2eB TRÊN HEO part 5

kết tủa khuyếch tán trên thạch là một phương pháp kém nhạy, do đó kết quả âm tính có thể do những nguyên nhân sau đây: Hàm lƣợng kháng thể trong kháng huyết thanh quá thấp hay không có nên không có phản ứng kết tủa xảy ra. Hàm lƣợng độc tố: do dịch độc tố sử dụng trong thử nghiệm này là dịch lọc vi khuẩn nuôi cấy có thể hàm lƣợng độc tố thấp nên không đủ để phản ứng kết tủa xảy ra. Vì lí do trên nên chúng tôi tiến hành định tính kháng huyết thanh. | 28 kết tủa khuyếch tán trên thạch là một phương pháp kém nhạy do đó kết quả âm tính có thể do những nguyên nhân sau đây Hàm lượng kháng thể trong kháng huyết thanh quá thấp hay không có nên không có phản ứng kết tủa xảy ra. Hàm lượng độc tố do dịch độc tố sử dụng trong thử nghiệm này là dịch lọc vi khuẩn nuôi cấy có thể hàm lượng độc tố thấp nên không đủ để phản ứng kết tủa xảy ra. Vì lí do trên nên chúng tôi tiến hành định tính kháng huyết thanh bằng phương pháp kết tủa khuyếch tán trên thạch với kháng nguyên là protein tái tổ hợp MBP -VT2eB. Với kháng nguyên MBP-VT2eB Tiến hành định tính kháng huyết thanh bằng phương pháp kết tủa khuyếch tán trên thạch với kháng nguyên là protein tái tổ hợp MBP-VT2eB có nồng độ 0 38mg ml được kết quả như sau Đối với đối chứng dương kết quả dương tính đến nồng độ protein pha loãng 1 4 hình Đối với mẫu huyết thanh kết quả âm tính m ất cả các mẫu hình Vạch kết tủa Hình Kết quả dương tính với huyết thanh thỏ Hình Kết quả âm tính với huyết thanh heo KT Kháng thể Kháng nguyên protein MBP-VT2eB ml nguyên pha loãng 1 2. Kháng nguyên pha loãng nguyên pha loãng 4. Kháng nguyên pha loãng 1 8 5. Kháng nguyên pha loãng 1 16 6. Kháng nguyên pha loãng 1 32 28 29 Từ đó kết luận liều tiêm 50pg heo và 75pg heo có lập lại và không lập lại đều tạo lượng kháng thể không đủ để phát hiện bằng phương pháp kết tuả khuyếch tán trên thạch. LIỀU TCID50 Của dịch lọc VI KHUẢN Thực hiện chuẩn độ độc tố VT2e đã lọc qua màng lọc 0 45 pm trên môi trường nuôi cấy tế bào vero có kết qủa như sau Hình thái tế bào khi quan sát dưới kính hiển vi tại thời điểm 24- 48 giờ J Thời điểm 24 giờ Ở giếng đối chứng tế bào và giếng DH5a thảm tế bào phát triển tốt. Ở các giếng nồng độ pha loãng 1 2 thấy có xuất hiện các tế bào chết nhiều hơn so với các giếng có nồng độ pha loãng thấp hơn nhưng số lượng chưa nhiều các tế bào chết có hình dạng co tròn và sẫm màu hơn so với thảm tế bào ở dưới môi trường có sự đổi màu từ màu hồng sang