tailieunhanh - Luân. văn : Xây dựng quy trình biến nạp đoạn DNA vào tế bào vi khuẩn E.coly DH5α part 8

Mẫu số : Sản phẩm PCR trên genome và trên plasmid có trọng lƣong phân tử băng nhau, chứng tỏ đã chèn đƣơc đoạn DNA kých thƣớc 580bp vào plasmid và biến nạp thành công vào vi khuẩn DH5α. Mẫu số : Sản phẩm PCR trên plasmid có kých thƣớc lớn hơn sản phẩm PCR trên genome, kết quả trên band diện di cho thấy sản phẩm này có kých thƣớc tƣơng đƣơng với tổng kých thƣớc của đoạn DNA chèn và kých thƣớc của vùng . | 580bp 629bp Hình Kết quả điện di sản phẩm PCR trên plasmid tái tổ hợp. 1 đối chứng mẫu số sản phẩm PCR từ genome đoạn DNA insert 2 sản phẩm PCR plasmid mẫu số với cặp primer của chính đoạn gen đó ITS4 ITS5 3 leader 100bp 4 sản phẩm PCR plasmid mẫu số với cặp primer T3 T7 5 đối chứng mẫu số đoạn DNA insert . Mẫu số Sản phẩm PCR trên genome và trên plasmid có trọng luong phân tử băng nhau chứng tỏ đã chèn đuơc đoạn DNA kých thuớc 580bp vào plasmid và biến nạp thành công vào vi khuẩn DH5a. Mẫu số Sản phẩm PCR trên plasmid có kých thuớc lớn hơn sản phẩm PCR trên genome kết quả trên band diện di cho thấy sản phẩm này có kých thuớc tuơng đuơng với tổng kých thuớc của đoạn DNA chèn và kých thuớc của vùng poly cloning site trên plasmid. Điều này cho thấy phản ứng nối đã không gây ảnh huởng khả năng hoạt động của T3 T7 RNA polymerase promoter. Tuy nhiên mức độ khuyếch đại của phản ứng này thấp nguyên nhân có thể do bởi phản ứng PCR chua hoàn chỉnh 57 PHẦN 5 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ Kết luận Chúng tôi đã xây dựng được quy trình chuyển một đoạn DNA bất kỳ vào tế bào chủ DH5a. Quy trình này có thể sử dụng cho các thí nghiệm tạo dòng áp dụng trực tiếp tại phòng thí nghiêm. Các bước chính trong quy trình là Chuẩn bị khả nạp Dịch tế bào chuẩn bị để làm khả nạp phải có mật độ tế bào từ 5 x 107 đến 108 và tiến hành theo quy trình sau Bước 1 Chuyển bình tam giác chứa dịch nuôi cấy vào thùng nước đá giữ lạnh trong 10 phút. Bước 2 Hút dịch nuôi cấy cho vào eppendorf ly tâm 4000 vòng phút trong 10 phút ở 40C. Bước 3 Đổ bỏ phần dịch bên trên thu phần sinh khối kết tủa bên dưới. Lập lại bước này 3 lần. Bước 4 Cho 1 ml CaCl2 100mM lạnh vào eppendorf chứa phần sinh khối vừa thu được. Vortex nhẹ để làm tan hết phần kết tủa. Bước 5 Ly tâm 4000 vòng phút trong 10phút ở 40c Bước 6 Đổ bỏ phần dịch bên trên lật ngược eppendorf 1 phút để làm khô kết tủa. Bước 7 Cho 150pl CaCl2 100mM lạnh vào hòa tan phần kết tủa trên. Thêm 20pl glycerol 98 vào và trữ ở .