tailieunhanh - Luân. văn : Xây dựng quy trình biến nạp đoạn DNA vào tế bào vi khuẩn E.coly DH5α part 7

Xây dựng đƣờng tƣơng quan tuyến tính giữa giá trị OD600nm và mật số tế bào vi khuẩn dựa trên sự tƣơng quan của số tế bào theo thời gian nuôi cấy kết hợp với tƣơng quan của giá trị OD600nm theo thời gian nuôi cấy. Thiết lập quy trình chuẩn bị tế bào khả nạp sử dụng hóa chất. | chất chỉ thu được toàn plasmid. Như vậy đây là quy trình tách chiết plasmid chuẩn mọi sai sót xảy ra đều có thể khắc phục. Kết quả tách chiết chủ yếu phụ thuộc nhiều vào thao tác hoá chất sử dụng đơn giản. DNA plasmid Hình Sản phẩm tách chiết plasmid trên gel agarose lần 2 . DC plasmid đối chứng mẫu 1 2 3 4 5 là sản phẩm tách chiết plasmid của các khuẩn lạc từ tỉ lệ biến nạp theo thể tích giữa tế bào khả nạp và plasmid là 3 điện di ở hiệu điện thế 100V thời gian 30phút. DNA plasmid Hình Sản phẩm tách chiết plasmid trên gel agarose lần 3 . DC plasmid đối chứng mẫu 1 2 3 4 5 là sản phẩm tách chiết plasmid của các khuẩn lạc từ tỉ lệ biến nạp theo thể tích giữa tế bào khả nạp và plasmid là 3 điện di ở 100V trong 30 phút. Qua 3 lần tách chiết chúng tôi đã hoàn thiện được quy trình tách chiết plasmid từ vi khuẩn biến nạp kết quả tách chiết không còn lẫn DNA genome và các tạp 49 chất khác. Sản phẩm tách chiết có thể dùng để thực hiện phản ứng cắt với enzym cắt giới hạn đây là cơ sở để kiểm tra kết quả biến nạp. Những điểm cần lưu ý khi chiết tách plasmid Khi thêm dung dịch III vào phải ly tâm ngay nếu không DNA của bộ gen sẽ phục hồi cấu trúc vì vậy trong sản phẩm plasmid chiết tách sẽ có lẫn DNA của bộ gen. Ở bước 7 và 8 trong quy trình tách chiết sau khi ly tâm xong phải lấy ra nhẹ nhàng và cẩn thận hút phần dịch nổi bên trên không được hút xuống phần bên dưới. Phản ứng cắt plasmid bằng enzym cắt giới hạn EcoRN DNA plasmid Hình Kết quả điện di sản phẩm cắt plasmid bằng EcoRV trên gel agarose . EcoRV sản phẩm cắt bằng enzym EcoRV của plasmid tách chiết từ tỉ lệ biến nạp theo thể tích giữa tế bào khả nạp và plasmid là 3 lần 1 DC1 plasmid gốc chưa biến nạp DC2 DC3 plasmid đối chứng từ sản phẩm tách chiết. Kết quả trên hình cho thấy plasmid đã được cắt hoàn toàn và đúng như kých của plasmid đối chứng vector đã được mở vòng tại vùng MCS. Từ dạng thẳng này chúng ta có thể thực hiện phản ứng khử phosphoril ở .