tailieunhanh - Công nghệ sinh học phân tử

Các bước cơ bản tạo ADN tái tổ hợp: • Tách chiết phân tách AND ngoại lai từ sinh vật đích • Phản ứng nối AND – vector tạo phân tử AND TTH • Chuyển AND TTH vào tế bào chủ • Chọn lọc các tế bào mang AND TTH • Sản xuất, tinh sạch protein | CÔNG NGHỆ SINH HỌC PHÂN TỬ CÔNG NGHỆ ADN TÁI TỔ HỢP Tách chiết phân tách AND ngoại lai từ sinh vật đích Phản ứng nối AND – vector tạo phân tử AND TTH Chuyển AND TTH vào tế bào chủ Chọn lọc các tế bào mang AND TTH Sản xuất, tinh sạch protein Các bước cơ bản tạo ADNtái tổ hợp Endonuclease giới hạn (RE) CÔNG NGHỆ ADN TÁI TỔ HỢP CÔNG NGHỆ ADN TÁI TỔ HỢP Vector plasmid Vector thực khuẩn thể lambda Cosmid BAC YAC Vector nhân dòng 1. Vector plasmid Thao tác biểu hiện ở sinh vật nhân sơ Biểu hiện gen ở các promoter mạnh và có thể điều chỉnh Promoter mạnh Có ái lực cao với ARN – pol vùng nằm ngay sau nó được phiên mã thường xuyên Tối ưu hóa sự biểu hiện của gen nhân dòng Khó khăn: Kiệt quệ năng lượng của tế bào chủ suy yếu các chức năng cần thiết Promoter có thể điều chỉnh Chỉ biểu hiện gen nhân dòng trong giai đoạn sinh trưởng đặc biệt của tế bào chủ Chỉ biểu hiện trong một thời gian xác định Một số promoter phổ biến Promoter lac Promoter trp Promoter tac Promoter trc Promoter pL Promoter gen 10 từ thực khuẩn thể T7 Thao tác biểu hiện ở sinh vật nhân sơ Thao tác biểu hiện ở sinh vật nhân sơ Promoter lac Nồng độ glucose Nồng độ lactose Nồng độ AMPv Vùng promoter – operator lac Mức độ phiên mã Thấp Thấp cao Thấp cao Thấp Thấp Thấp cao cao Thấp Thấp Thấp cao cao cao gen operator promoter gen operator promoter gen operator promoter gen operator promoter CAP AMPv Thể ức chế lac Thể ức chế lac CAP AMPv Promoter trp Điều hòa âm: nồng độ trp tăng đóng promoter ức chế phiên mã Hiện tượng “rò rỉ”: phiên mã vẫn diễn ra ngay cả khi gen đã đóng lại Thao tác biểu hiện ở sinh vật nhân sơ Promoter tac và trc: Chứa vùng -35 của promoter trp và vùng -10 của promoter lac khác nhau một cặp base duy nhất: Promoter tac: vùng -35 của trp và -10 của lac cách nhau 16 base Promoter trc: vùng -35 của trp và -10 của lac cách nhau 17 base Đều được cảm ứng khi bổ sung IPTG vào môi trường Mạnh hơn promoter trp 3 lần, hơn promoter lac 10 lần Thao tác biểu hiện ở sinh vật nhân sơ Promoter Pl Được kiểm | CÔNG NGHỆ SINH HỌC PHÂN TỬ CÔNG NGHỆ ADN TÁI TỔ HỢP Tách chiết phân tách AND ngoại lai từ sinh vật đích Phản ứng nối AND – vector tạo phân tử AND TTH Chuyển AND TTH vào tế bào chủ Chọn lọc các tế bào mang AND TTH Sản xuất, tinh sạch protein Các bước cơ bản tạo ADNtái tổ hợp Endonuclease giới hạn (RE) CÔNG NGHỆ ADN TÁI TỔ HỢP CÔNG NGHỆ ADN TÁI TỔ HỢP Vector plasmid Vector thực khuẩn thể lambda Cosmid BAC YAC Vector nhân dòng 1. Vector plasmid Thao tác biểu hiện ở sinh vật nhân sơ Biểu hiện gen ở các promoter mạnh và có thể điều chỉnh Promoter mạnh Có ái lực cao với ARN – pol vùng nằm ngay sau nó được phiên mã thường xuyên Tối ưu hóa sự biểu hiện của gen nhân dòng Khó khăn: Kiệt quệ năng lượng của tế bào chủ suy yếu các chức năng cần thiết Promoter có thể điều chỉnh Chỉ biểu hiện gen nhân dòng trong giai đoạn sinh trưởng đặc biệt của tế bào chủ Chỉ biểu hiện trong một thời gian xác định Một số promoter phổ biến Promoter lac Promoter trp Promoter tac Promoter trc Promoter pL Promoter .