tailieunhanh - Một số phương pháp hóa phân loại xạ khuẩn – Phần 2

Phân tích thành phần acid béo 1. 5mg tế bào khô + dung dịch kiềm (R1) 1ml, vortex 5- 10 sec, giữ ở 100oC trong 5min, vortex 5-10 sec, giữ tiếp ở 100oC trong 25min, để nguội xuống nhiệt độ phòng, có thể đặt trực tiếp dưới vòi nước sau khi hạ xuống 80oC 2. Thêm dung dịch methyl hóa (R2): 2ml, giữ ở 80oC trong 10min, để nguội xuống nhiệt độ phòng. Quá trình này thấy xuất hiện khói trắng 3. Thêm dung dịch tách (R3) 3ml, đảo lộn đầu đuôi nhẹ nhàng trong10min, loại bỏ lớp dưới. | Một số phương pháp hóa phân loại xạ khuẩn - Phần 2 Phân tích thành phần acid béo 1. 5mg tế bào khô dung dịch kiềm R1 1ml vortex 5- 10 sec giữ ở 100oC trong 5min vortex 5-10 sec giữ tiếp ở 100oC trong 25min để nguội xuống nhiệt độ phòng có thể đặt trực tiếp dưới vòi nước sau khi hạ xuống 80oC 2. Thêm dung dịch methyl hóa R2 2ml giữ ở 80oC trong 10min để nguội xuống nhiệt độ phòng. Quá trình này thấy xuất hiện khói trắng 3. Thêm dung dịch tách R3 3ml đảo lộn đầu đuôi nhẹ nhàng trong10min loại bỏ lớp dưới lớp nước 4. Thêm dịch rửa R4 3ml đảo lộn đầu đuôi nhẹ nhàng trong 5 min ly tâm 2000rpm trong 3min chuyển 2 3 lớp trên lớp dung môi sang ống đựng mẫu mẫu thường không màu 5. Nếu lớp phía trên chưa trong thêm 1-3 giọt dung dịch R5 đảo lộn đầu đuôi nhẹ nhàng trong 5min ly tâm lại lần nữa. Chú ý Các bước cần thực hiện liên tục trước khi tiến hành cần chuẩn bị heatblock 100 and 80oC. R1 NaOH 15g Methanol HPLC grade 50 mg MQ 50ml R2 6N HCl 65ml Methanol HPLC grade 55ml pH R3 n-hexane HPLC grade or n-hexane 1000 50ml methyl-ter-butyl ethel HPLC grade 50ml R4 NaOH MQ 900ml R5 100ml MQ 40g NaCl 6. Mầu được phân tích bằng sắc ký khí hệ thống MIDI Phân tích thành phần phospholipid 1. 100mg tế bào khô dung dịch chlorofolm methanol 0 3 NaCl 50 100 40 2ml 4ml 1 6ml . Trộn bằng khuấy từ trong 4 giờ. Chuyển sang ống ống falcon ly tâm 3000 rpm trong 5 phút. 2. Lấy dịch trên. Thêm 1 75ml NaCl và 1 75ml chloroform. Lắc đều ly tâm 5000 rpm trong 5 phút. Loại lớp trên cùng và lớp giữa. 3. Làm khô bằng Nitơ lỏng. Nếu ngừng công việc giữ ở -20oC. 4. Hòa tan bằng 100 Lil ethanol. 5. Chấm mẫu lên 4 bản HP-TLC high performance 6. Dung môi chạy TLC chiều 1 Chloroform Methanol Water 65 25 4 Dung môi chạy TLC chiều 2 Trước khi chạy chiều 2 chấm Standard Chloroform Acetic acid Methanol Water 80 18 12 5 7. Nhận biết các loại phospholipid