tailieunhanh - Đề tài: PHƯƠNG PHÁP PCR

PCR ( Polymerase Chain Reaction ) là phản ứng chuỗi trùng hợp hay còn gọi là "phản ứng khuếch đại gen“. Trong ngành thủy sản việc áp dụng kỹ thuật PCR để phát hiện ra các mầm bệnh do virus gây ra như bệnh đốm trắng,bệnh đầu vàng, hội chứng Taura trên là phương pháp in vitro để tổng hợp một đoạn DNA đặc thù nhờ công hiệu của 2 mồi gắn vào 2 sợi đơn của đoạn DNA đích với sự tham gia của DNA polymerase | Đề tài: PHƯƠNG PHÁP PCR BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH KHOA THỦY SẢN GVHD : LÊ THỊ PHƯƠNG HỒNG 1 Thành viên nhóm Nguyễn Thị Huỳnh Nga 08141029 Phan Thị Bích Tuyền 08141063 Nguyễn Minh Quân 08141123 Mai Thị Nga 08141105 Mục lục I. Giới thiệu II. Nguyên tắc PCR III. Điều kiện phản ứng PCR IV. Quy trình phản ứng PCR đoạn biến tính đoạn bắt mồi đoạn kéo dài V. Ý nghĩa và các ứng dụng PCR VII. Các hạn chế Tài liệu tham khảo GIỚI THIỆU PCR ( Polymerase Chain Reaction ) là phản ứng chuỗi trùng hợp hay còn gọi là "phản ứng khuếch đại gen“. Trong ngành thủy sản việc áp dụng kỹ thuật PCR để phát hiện ra các mầm bệnh do virus gây ra như bệnh đốm trắng,bệnh đầu vàng, hội chứng Taura trên tôm. II. Nguyên tắc PCR PCR là phương pháp in vitro để tổng hợp một đoạn DNA đặc thù nhờ công hiệu của 2 mồi gắn vào 2 sợi đơn của đoạn DNA đích với sự tham gia của DNA polymerase. Đoạn mồi này sau đó sẽ được nối dài ra nhờ hoạt động của DNA | Đề tài: PHƯƠNG PHÁP PCR BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH KHOA THỦY SẢN GVHD : LÊ THỊ PHƯƠNG HỒNG 1 Thành viên nhóm Nguyễn Thị Huỳnh Nga 08141029 Phan Thị Bích Tuyền 08141063 Nguyễn Minh Quân 08141123 Mai Thị Nga 08141105 Mục lục I. Giới thiệu II. Nguyên tắc PCR III. Điều kiện phản ứng PCR IV. Quy trình phản ứng PCR đoạn biến tính đoạn bắt mồi đoạn kéo dài V. Ý nghĩa và các ứng dụng PCR VII. Các hạn chế Tài liệu tham khảo GIỚI THIỆU PCR ( Polymerase Chain Reaction ) là phản ứng chuỗi trùng hợp hay còn gọi là "phản ứng khuếch đại gen“. Trong ngành thủy sản việc áp dụng kỹ thuật PCR để phát hiện ra các mầm bệnh do virus gây ra như bệnh đốm trắng,bệnh đầu vàng, hội chứng Taura trên tôm. II. Nguyên tắc PCR PCR là phương pháp in vitro để tổng hợp một đoạn DNA đặc thù nhờ công hiệu của 2 mồi gắn vào 2 sợi đơn của đoạn DNA đích với sự tham gia của DNA polymerase. Đoạn mồi này sau đó sẽ được nối dài ra nhờ hoạt động của DNA polymerase để hình thành một mạch mới hoàn chỉnh. II. Nguyên tắc PCR Một phản ứng PCR là một chuỗi nhiều chu kỳ nối tiếp nhau, mỗi chu kỳ gồm ba giai đoạn: 1 chu kỳ GĐ Biến tính GĐ Bắt mồi GĐ Kéo dài III. Điều kiện phản ứng PCR Ðể thử nghiệm PCR có thể chạy được, cần phải có đầy đủ các thành phần sau : Hình : Thực nghiệm PCR 1. Nước Nước sử dụng cho phản ứng PCR phải thật tinh khiết, không chứa ion nào, không chứa DNAase, RNAase, enzyme cắt giới hạn . 2. Dung dịch đệm cho phản ứng PCR: Thành phần dung dịch đệm thường phụ thuộc vào loại enzyme DNA polymerase sử dụng trong PCR, dung dịch đệm thường chứa muối đệm Tris HCl 10 mM, KCl 50 mM và MgCl2 mM Nồng độ MgCl2 có thể dao động từ mM. Chính ion Mg2+ gắn kết dNTP với DNA polymerase, tăng khả năng bám nối của mồi. 3. Deoxynucleotide triphosphat (dNTPs): Deoxyadenosine 5’ triphosphate 3. Deoxynucleotide triphosphat (dNTPs): Nồng độ khoảng chừng 100 mM cho mỗi nucleotide: dATP, dCTP, dGTP, dTTP . .