tailieunhanh - GIẢI TRÌNH TỰ GEN

Có 2 phương pháp chính - Phương pháp hóa học Maxam – Gilbert: đây là phương pháp được sử dụng đầu tiên để xác định trình tự gen nhưng hiện nay không còn được sử dụng phổ biến nữa - Phương pháp Enzyme Sanger Nguyên lý - Sử dụng các chất hóa học cắt đứt sợi DNA lại 1 loại nucleotide đặc hiệu | GIẢI TRÌNH TỰ GEN C¸c ph­¬ng ph¸p gi¶i tr×nh tù gen Cã 2 ph­¬ng ph¸p chÝnh: Ph­¬ng ph¸p ho¸ häc Maxam – Gilbert: ®©y lµ ph­¬ng ph¸p ®­îc sö dông ®Çu tiªn ®Ó x¸c ®Þnh tr×nh tù gen nh­ng hiÖn nay kh«ng cßn ®ù¬c sö dông phæ biÕn n÷a. Ph­¬ng ph¸p Enzyme Sanger 1. Ph­¬ng ph¸p ho¸ häc Maxam - Gilbert Walter Gilbert Nguyªn lý Sö dông c¸c chÊt ho¸ häc c¾t ®øt sîi DNA t¹i 1 lo¹i nucleotide ®Æc hiÖu Ph©n tö DNA kÐp ®­îc ®¸nh dÊu P32 t¹i ®Çu 5’ T¸ch rêi 2 sîi ®¬n b»ng nhiÖt Xö lý ho¸ häc sao cho chØ cã 1 lo¹i nucleotide bÞ ph¸ huû -> hµng lo¹t ®o¹n DNA cã kÝch th­íc kh¸c nhau ®­îc t¹o thµnh (sö dông c¸c chÊt ho¸ häc kh¸c nhau ph¸ huû 4 lo¹i nucleotide b»ng 4 ph¶n øng riªng biÖt) TiÕn hµnh ®iÖn di c¸c ®o¹n DNA thu ®ù¬c trªn gel polyacrylamide, chØ quan s¸t ®ù¬c ®o¹n cã g¾n P32. §o¹n DNA ng¾n nhÊt cã ®¸nh dÊu phãng x¹ sÏ ch¹y nhanh nhÊt d­íi t¸c dông cña ®iÖn tr­êng. C¨n cø vµo vÞ trÝ c¸c v¹ch quan s¸t ®­îc trªn gel mµ x¸c ®Þnh tr×nh tù c¸c nucleotide. 5’- Treat with chemicals that specifically cleave at a certain base. 4 tubes G-rxn A>G -rxn T>C -rxn C-rxn 5’- 5’- 5’- C The reaction is done such that each strand is cleaved only once C T A G ddNTP Reaction Mix 3’ G C A T T C C A T A G G 5’ MAXAM-GILBERT CHEMICAL SEQUENCING Labeled strand (P32) C C Sequence is read directly autoradiograph of dried sequencing gel Ph¸ huû c¸c nucleotide Trong ph­¬ng ph¸p nµy sö dông 5 ph¶n øng c¬ b¶n: Dimethylsulfate ë pH sÏ lµm thay ®æi Guanine (G). Piperidine formate ë pH sÏ ph¸ vì cÇu nèi glycoside gi÷a deoxyribose víi purine (G,A) Hydrazine: më c¸c vßng pyrimidine (C , T) Hydrazine khi cã NaCl chØ cã t¸c dông ®èi víi C NaOH ë 900C sÏ ph¸ huû A m¹nh vµ C kÐm. KÕt qu¶: Dimethylsulfate at pH -----------> G Piperidine formate at pH -------> G and A Hydrazine ------------------------------> C and T Hydrazine in M NaCl -----------> C N NaOH at 90 oC -----------------> A and C 5’GACGTACTTA3’ G G+A T+C C A>C N NaOH at 90 oC A>C Hydrazine T+C Piperidine formate | GIẢI TRÌNH TỰ GEN C¸c ph­¬ng ph¸p gi¶i tr×nh tù gen Cã 2 ph­¬ng ph¸p chÝnh: Ph­¬ng ph¸p ho¸ häc Maxam – Gilbert: ®©y lµ ph­¬ng ph¸p ®­îc sö dông ®Çu tiªn ®Ó x¸c ®Þnh tr×nh tù gen nh­ng hiÖn nay kh«ng cßn ®ù¬c sö dông phæ biÕn n÷a. Ph­¬ng ph¸p Enzyme Sanger 1. Ph­¬ng ph¸p ho¸ häc Maxam - Gilbert Walter Gilbert Nguyªn lý Sö dông c¸c chÊt ho¸ häc c¾t ®øt sîi DNA t¹i 1 lo¹i nucleotide ®Æc hiÖu Ph©n tö DNA kÐp ®­îc ®¸nh dÊu P32 t¹i ®Çu 5’ T¸ch rêi 2 sîi ®¬n b»ng nhiÖt Xö lý ho¸ häc sao cho chØ cã 1 lo¹i nucleotide bÞ ph¸ huû -> hµng lo¹t ®o¹n DNA cã kÝch th­íc kh¸c nhau ®­îc t¹o thµnh (sö dông c¸c chÊt ho¸ häc kh¸c nhau ph¸ huû 4 lo¹i nucleotide b»ng 4 ph¶n øng riªng biÖt) TiÕn hµnh ®iÖn di c¸c ®o¹n DNA thu ®ù¬c trªn gel polyacrylamide, chØ quan s¸t ®ù¬c ®o¹n cã g¾n P32. §o¹n DNA ng¾n nhÊt cã ®¸nh dÊu phãng x¹ sÏ ch¹y nhanh nhÊt d­íi t¸c dông cña ®iÖn tr­êng. C¨n cø vµo vÞ trÝ c¸c v¹ch quan s¸t ®­îc trªn gel mµ x¸c ®Þnh tr×nh tù c¸c nucleotide. 5’- Treat with chemicals that specifically .

• Sinh học
• giải trình tự gen
• gen
• công nghệ gen
• nghiên cứu sinh học
• sinh học
• bài giảng sinh học
• Bài giảng Giải trình tự gen
• Ứng dụng chuẩn đoán bệnh
• Giải trình tự DNA
• Giải trình tự bằng sinh tổng hợp
• Qui trình chuẩn đoán gen IX factor
• Nghiên cứu y học
• Ung thư phổi
• Giải trình tự thế hệ mới
• Đột biến gen EGFR
• Đột biến gen ALK
• Đột biến gen BRAF
• Đột biến gen ROS1
• Đột biến gen NRAS
• Phân lập gen virus đậu trên dê
• Giải trình tự gen virus đậu trên dê
• Gen virus đậu trên dê
• Dê ở Việt Nam
• Giải trình tự hệ gen mã hoá
• Loạn sản ngoại bì
• Đột biến gen EDA
• Kỹ thuật giải trình tự hệ gen mã hóa WES
• Tạp chí nghiên cứu y học
• Xác định đột biến gen CYP1B1
• Đột biến gen CYP1B1
• Bệnh nhân glôcôm bẩm sinh nguyên phát
• Kĩ thuật giải trình tự gen
• Bệnh nhân glôcôm bẩm sinh
• Phát hiện đột biến gen CYBB
• Gây u hạt mạn tính
• Giải trình tự toàn bộ vùng gen
• Đột biến gen
• Vi khuẩn Enterobacteriaciae
• Gen siêu vi viêm gan C
• Giải trình tự trên đoạn gen 5’NC
• Giải trình tự trên đoạn gen NS5B
• Trung Tâm Y Khoa MEDIC
• Kỹ thuật xác định genotype
• Bài viết y học
• Ung thư da
• Đột biến gen TP53
• Mô ung thư da
• Phương pháp giải trình tự gen
• Luận án tiến sĩ
• Luận án tiến sĩ Y học
• Chuyên ngành Hóa sinh
• Giải trình tự gen thế hệ mới
• Xác định tính đa hình thái đơn
• Đa hình thái đơn Pro47ser gen P53
• Bệnh nhân ung thư phổi
• Kỹ thuật giải trình tự gen
• Vị trí codon 47
• Bệnh vảy da cá
• Giải trình tự gen đích
• Đột biến mới
• Sừng hóa da
• Gen mã hóa Transglutaminase 1
• Tạo dòng gen Laccase 3
• Giải trình tự gen Laccase 3
• Gen Laccase 3 từ Fusarium Oxysporum
• Enzyme oxi hóa nhân đồng
• Ứng dụng laccase tái tổ hợp
• Tạp chí Tim mạch học Việt Nam
• Bài viết về y học
• Giải trình tự gen toàn bộ vùng mã hóa
• Bệnh cơ tim vô căn
• Bệnh đa gen gây rối loạn
• Bệnh cơ tim phì đại
• Kỹ thuật Scorpion Arms
• Ung thư phổi không tế bào nhỏ
• Non small cell lung cancer
• Bệnh α thalassemia
• Bệnh di truyền đơn gen
• Đặc điểm α thalassemia
• Tầm soát bệnh thalassemia
• Loạn dưỡng cơ Duchenne
• Phát hiện người lành mang gen bệnh
• Đột biến xóa đoạn
• Giải trình tự Sanger
• Đột biến gen HBB
• Gen bệnh β thalassemia
• Rối loạn di truyền
• Xác định người lành mang gen bệnh hemophilia A
• Gen bệnh hemophilia A
• Kỹ thuật Microsatellite
• người lành mang gen bệnh
• Tạp chí Khoa học Công nghệ Nông nghiệp
• Bài viết về nông nghiệp
• Giải trình tự
• ADN mã vạch
• Đoạn gen matK
• Giải trình tự gen 16s rRNA
• Cây phát sinh loài
• Các loài cua xanh
• Xác định quan hệ di truyền
• Quan hệ di truyền
• Tạp chí y học
• Khuếch đại gen
• Quy trình giải trình tự
• Trình tự gen APC
• Đột biến gen p53
• Ung thư vú
• Nhuộm hoá mô miễn dịch
• Tăng sản thượng thận bẩm sinh
• Đột biến điểm gen CYP21A2