tailieunhanh - Giáo trình DNA tái tổ hợp part 6

Hình . Phân tử DNA của phage . A: Tự tái bản DNA từ dạng vòng của làm cho nó trở thành dạng dây thẳng, hình thành các đoạn chồng lấp lên nhau, với độ dài khoảng 50 kb. B: Mỗi đầu đều chứa đầy 50 kb đơn vị của DNA, trước khi đuôi được tổng hợp gắn vào sau. | B A Hình . Phân tử DNA của phage Ầ. A Tự tái bản DNA từ dạng vòng của À. làm cho nó trở thành dạng dây thẳng hình thành các đoạn chồng lấp lên nhau với độ dài khoảng 50 kb. B Mỗi đầu đều chứa đầy 50 kb đơn vị của ÂDNA trước khi đuôi được tổng hợp gắn vào sau. Một số vector À. đã được thiết kế thuận lợi cho sinh trưởng của chúng trong E. coli mang prophage P2. phenotype này được gọi là Spi . Các chủng X thiếu hai gen cần thiết trong tái tổ hợp red và gam biểu hiện phenotype Spi sẽ sinh trưởng tốt trong các thể tiềm tan P2 chừng nào mà chúng còn mang chuỗi chi chi là cơ chất cho sự tái tổ hợp được xúc tác bởi hệ thống rec A . Tạo dòng ở các vector À. À 1059 hoặc À BF101 đã được tiến hành bằng cách loại bỏ đoạn stuffer chứa red và gam. Kết quả thu được phage tái tổ hợp là Spi và chúng có thể được nhận biết hoặc chọn lọc bằng khả năng sinh trưởng của chúng trên các thể tiềm tan P2 recA của E. coli. Hầu hết các vector thay the mat gen gam khi đoạn stuffer bị loại bỏ. Các thể tái tổ hợp được tạo thành với các vector như thế phải được sinh sản trong vi khuẩn recA . Phage Âsep6-lac5 mang các gen red và gam trong nhánh phải của nó và các thể tái tổ hợp được tạo thành với vector này có phenotype Spi có thể dược nhân lên trong vi khuẩn mang đột biến recA-. Công nghệ DNA tái tổ hợp 88 . Những vector X được cải tiến Những vector X thường được cải tiến nhằm mục đích - Tăng khả năng thích ứng của các đoạn DNA ngoại lai khác nhau với các RE. - Cho phép chọn lựa phương thức tái tổ hợp mong muốn. - Cho phép có được các RNA probe sẵn sàng cho việc chuyển mã của DNA ngoại lai gắn vào vector. Điều này giúp chúng ta dễ dàng sàng lọc các thư viện trong quá trình chromosome walking ví dụ như X ZAP. - Phát triển các vector trong quá trình gắn vào cDNA của sinh vật bậc cao dưới hình thức một polypeptide dung hợp với P-galactosidase. Hình thức này rất hữu ích trong việc chọn lọc kháng thể ví dụ như vector Âgt11. 5 .GGATC TGGGT CGACG GATCC GGGGA ATTCC CAGAT I II I I _ _ I .