tailieunhanh - Thí nghiệm nuôi cấy mô và tế bào thực vật - Bài 4

Nuôi cấy đơn bội in vitro I. Mục đích và yêu cầu Trong công tác giống cây trồng, kỹ thuật tạo dòng thuần chủng luôn luôn giữ vai trò quan trọng. Có nhiều phương pháp tạo dòng thuần chủng khác nhau, nhưng thông thường nhất là tiến hành chọn lọc và kiểm tra qua nhiều thế hệ tự phối. Cách làm này mang lại kết quả chắc chắn, nhưng đòi hỏi chi phí lớn về trồng trọt và mất nhiều thời gian. Bằng con đường đơn bội, nghĩa là chọn ra những cá thể 1n rồi sau đó lưỡng bội hóa. | 172 Bài 4 Nuôi cấy đơn bội in vitro I. Mục đích và yêu cầu Trong công tác giống cây trồng kỹ thuật tạo dòng thuần chủng luôn luôn giữ vai trò quan trọng. Có nhiều phương pháp tạo dòng thuần chủng khác nhau nhưng thông thường nhất là tiến hành chọn lọc và kiểm tra qua nhiều thế hệ tự phối. Cách làm này mang lại kết quả chắc chắn nhưng đòi hỏi chi phí lớn về trồng trọt và mất nhiều thời gian. Bằng con đường đơn bội nghĩa là chọn ra những cá thể 1n rồi sau đó lưỡng bội hóa chúng trong một thời gian ngắn sẽ thu được những cá thể đồng hợp tử tuyệt đối đó là những dòng thuần rất lý tưởng. Hai biện pháp truyền thống để thu được cây đơn bội là - Chọn lọc đơn bội xuất hiện ngẫu nhiên. - Lai xa và chọn lọc sau khi bộ nhiễm sắc thể của một trong hai giao tử mất đi thoái biến sẽ thu được thể đơn bội hiện tượng này chỉ mới phát hiện được ở một số cặp lai khác loài của đại mạch. Tuy nhiên vấn đề đặt ra là làm sao để có được một số lượng cây đơn bội lớn. Phương pháp này hầu như không thể giải quyết vấn đề nói trên. Năm 1964 Guha và Maheshawari đã đưa ra một phương pháp tạo cây đơn bội mới đó là tạo cây đơn bội từ hạt phấn thông qua nuôi cấy in vitro. Trên nhiều đối tượng cây trồng phương pháp này đã tạo được hàng loạt cá thể đơn bội trong một thời gian ngắn chỉ một vài tháng . Chính vì vậy đã có nhiều chương trình tạo giống cây trồng ra đời trên cơ sở áp dụng kỹ thuật đơn bội in vitro và đã thu được kết quả tốt. Có hai trường hợp tạo cây đơn bội từ hạt phấn hạt phấn tạo trực tiếp cây đơn bội thường gặp ở thuốc lá hay hạt phấn tạo gián tiếp cây đơn bội thông qua giai đoạn phát triển callus ở lúa . Để tạo cây đơn bội kép có thể sử dụng hai phương thức cây đơn bội kép tạo từ cây đơn bội được xử lý colchicine hay cây đơn bội kép tái sinh từ callus của cây đơn bội trường hợp này thường chỉ đạt hiệu suất khoảng 60 . 173 II. Dụng cụ thiết bị hóa chất 1. Dụng cụ - Ông nghiệm 1 5 cm X 20 cm - Giấy thấm vô trùng - Giấy nhôm - Lọ khử trùng mẫu vật nuôi cấy - Forceps kéo dao mổ kim nhọn - .