tailieunhanh - ỨNG DỤNG PHƯƠNG PHÁP PCR ĐỂ TÌM VI TRÙNG LAO (Polymerase Chain Reaction)

Mycobacterium tuberculosis không thuộc nhóm Gram + hay Gram – vì phương pháp nhuộm Gram không nhuộm được nó mặc dầu vi trùng này cũng có 1 màng bọc peptydoglycan. Ngoài màng này còn có 1 màng sáp làm cho các thuốc nhuộm Gram không thấm vào được. Phương pháp thường dùng để tìm M. tuberculosis là phết đàm bệnh nhân lên kiếng (slide smear) và nhuộm bằng Ziehl-Neelsen Stain (Acid-fast Staining Method). Thuốc nhuộm carbon-fuchsin được đổ lên smear có vi trùng rối nung sôi để chất màu có thể thấm vào vi trùng, sau đó rửa bằng. | ỨNG DỤNG PHƯƠNG PHÁP PCR ĐỂ TÌM VI TRÙNG LAO Polymerase Chain Reaction Mycobacterium tuberculosis không thuộc nhóm Gram hay Gram -vì phương pháp nhuộm Gram không nhuộm được nó mặc dầu vi trùng này cũng có 1 màng bọc peptydoglycan. Ngoài màng này còn có 1 màng sáp làm cho các thuốc nhuộm Gram không thấm vào được. Phương pháp thường dùng để tìm M. tuberculosis là phết đàm bệnh nhân lên kiếng slide smear và nhuộm bằng Ziehl-Neelsen Stain Acid-fast Staining Method . Thuốc nhuộm carbon-fuchsin được đổ lên smear có vi trùng rối nung sôi để chất màu có thể thấm vào vi trùng sau đó rửa bằng cồn acid acid-alcohol . Vi trùng lao sẽ hiện ra với màu hồng rất dễ phân biệt với các vi trùng khác. Vi trùng M. tuberculosis rất khó nuôi và sinh trưởng rất chậm. Vì vậy muốn làm thử nghiệm để xem vi trùng nhạy cảm hay kháng thuốc thì cần phải có một thời gian tối thiểu 3-4 tháng mới có kết quả. Dùng phương pháp nuôi vi trùng bằng chất lỏng liquid media như BACTEC Systems Becton Dickinson Sparks MD USA thì cũng phải 3-4 tuần và cần nhiều dụng cụ đặc biệt đắt giá. Hiện nay có rất nhiều nghiên cứu dùng PCR để định vi trùng lao identify và xét định xem vi trùng sẽ kháng loại thuốc nào. Phản ứng PCR sẽ cho kết quả nhanh chóng trong khoảng 3-4 tiếng đồng hồ. Bộ gen genome của Mycobacterium tuberculosis gồm 44 411 529 base pairs với 4000 gen trong đó có gen IS6110 được rải rác nhiều nơi trong bộ gen. IS6110 có sequence rất cố định very conservative . Phương pháp PCR để tìm vi trùng Mycobacterium tuberculosis dựa trên amplification của gen IS6110 .DNA của Mycobacterium tuberculosis được trích tinh purification và dùng cho PCR với 2 dây mồi primers . PCR sẽ amplify một đoạn DNA fragment khoảng 120bp chuyên biệt cho gen IS6110. Khi PCR hoàn tất chất thử nghiệm sample sẽ dùng để điện di trên Agarose gel agarose gel electrophoresis để xác định kết quả. Sự hiện diện của đoạn DNA chứng minh là có DNA của M. tuberculosis. Nếu không thì kết quả là âm negative . Để tìm xem M. tuberculosis sẽ đề kháng