tailieunhanh - Hộp Điện Trong Công Nghệ DNA part 32

Tham khảo tài liệu 'hộp điện trong công nghệ dna part 32', kỹ thuật - công nghệ, điện - điện tử phục vụ nhu cầu học tập, nghiên cứu và làm việc hiệu quả | Cuối cùng nếu trình tự protein có sẵn từ đầu tận cùng amino của protein thì thư viện cDNA được sàng lọc phải có chất lượng cao để chắc chắn rằng hầu hết đầu tận cùng 5 của mRNA được đại diện. . Phát hiện miễn dịch các kháng nguyên đặc hiệu Các thư viện cDNA được xây dựng trong các vector biểu hiện như gt11 gt18-23 ZAP. có thể được sàng lọc bằng kháng thể theo hướng chống lại protein quan tâm. Các màng lọc nitrocellulose in các vết tan của vi khuẩn được ngâm trong dung dịch chứa kháng thể. Sau khi rửa màng lọc được ủ với protein A của Staphylococcus aureus hoặc bằng kháng thể thứ hai theo hướng chống lại các yếu tố quyết định kháng nguyên đặc hiệu loài của kháng thể thứ nhất. Ở các mô tả đầu tiên của phương pháp này phối tử ligand thứ hai được đánh dấu đồng vị phóng xạ với 125I. Ngày nay phối tử thứ hai được liên kết hóa trị với enzyme mà hoạt tính của enzyme có thể được phát hiện bằng hóa tổ chức học ví dụ alkaline phosphatase . Chìa khóa thành công của phương pháp này nằm trong chất lượng của kháng thể. Điều cần thiết là kháng thể nhận diện được protein bị biến tính Ví dụ nó phải cho các tín hiệu mạnh trong phân tích Western blot-xem chương 7 . Hơn nữa quá trình sàng lọc được tiến hành dễ dàng hơn và mẫn cảm hơn nếu kháng thể được bắt nguồn từ huyết thanh đa dòng polyclonal antiserum độ chuẩn cao. Bởi vì các huyết thanh như thế phản ứng bình thường với nhiều yếu tố quyết định kháng nguyên khác nhau cơ hội để phát hiện dòng cDNA biểu hiện đoạn protein quan tâm được tăng lên. Các huyết thanh đa dòng thường chứa các kháng thể phản ứng chéo nhận diện các thành phần không tái tổ hợp của vi khuẩn tiềm tan và chúng phải được loại bỏ trước khi quá trình sàng lọc được thực hiện. Phản ứng liên kết không đặc hiệu sẽ thấp hơn nhiều khi sử dụng kháng thể đơn dòng làm mẫu dò. Tuy nhiên số lượng các thể tái tổ hợp có thể được phát hiện cũng bị giảm bởi vì mỗi kháng thể đơn dòng riêng biệt có thể phản ứng với chỉ một yếu tố quyết định kháng nguyên đơn. Vì thế mẫu dò miễn dịch

TÀI LIỆU LIÊN QUAN
31    431    57
TỪ KHÓA LIÊN QUAN
crossorigin="anonymous">
Đã phát hiện trình chặn quảng cáo AdBlock
Trang web này phụ thuộc vào doanh thu từ số lần hiển thị quảng cáo để tồn tại. Vui lòng tắt trình chặn quảng cáo của bạn hoặc tạm dừng tính năng chặn quảng cáo cho trang web này.