tailieunhanh - Hộp Điện Trong Công Nghệ DNA part 24

Tham khảo tài liệu 'hộp điện trong công nghệ dna part 24', kỹ thuật - công nghệ, điện - điện tử phục vụ nhu cầu học tập, nghiên cứu và làm việc hiệu quả | Hình . Tạo dòng trong BAC vector - BAC vector được cắt bằng enzyme hạn chế Hin dlII có vị trí nhận biết nằm trên gen lacZ sau đó hai đầu HindlII của vector được dephosphoryl hóa bằng phosphatase để ngăn cản sự tái tạo lại vòng. - DNA có khối lượng phân tử cao được bọc trong agarose và sau đó phân đoạn cũng bằng Hindĩĩĩ như trường hợp vector. - Gắn vector và các đoạn DNA có kích thước 150 kb bằng enzyme T4 DNA ligase sau đó biến nạp vào E. coli bằng xung điện. - Chọn lọc thể tái tổ hợp trên môi trường nuôi cấy có bổ sung CM và IPTG. Các khuẩn lạc có màu trắng là khuẩn lạc mang thể tái tổ hợp còn các khuẩn lạc có màu xanh là khuẩn lạc không mang thể tái tổ hợp. VI. YAC vector 1. Đặc điểm của Y AC Nhiễm sắc thể nhân tạo của nấm men yeast artificial chromosome-YAC là các vector tạo dòng mạch thẳng dựa trên cấu trúc nhiễm sắc thể tự nhiên của nấm men. Chúng có thể được cắt thành hai đoạn hoặc hai nhánh nhiễm sắc thể để nhận các đoạn rất lớn có kích thước lên đến kb. Cấu trúc của YAC sau đó có thể đưa vào các tế bào nấm men có thành tế bào đã bị loại bỏ spheroplast ở đó chúng được duy trì ổn định như các nhiễm sắc thể tự trị autonomous . Thư viện YAC được lắp ráp và sử dụng cho việc lập bản đồ các vùng có kích thước lớn của DNA người. Do kích thước lớn của chúng cho nên kỹ thuật phân tích thích hợp hơn cả là điện di gel trường gián đoạn pulsed field gel electrophoresis-PFGE . Nhược điể m của YAC là hiệu suất tạo dòng của một vài hệ thống tương đối thấp sự xuất hiện các dòng khảm các tế bào biến nạp chứa hai mẫu DNA không liền kề nhau sự không ổn định của đoạn chèn và thao tác chúng tương đối khó khăn so với các hệ thống vi khuẩn. Trước năm 1987 các hệ thống tạo dòng thích hợp chủ yếu dựa trên E. coli và chỉ có thể nhận các đoạn DNA tương đối nhỏ. Các vector vi khuẩn có khả năng lớn nhất cũng chỉ có thể nhận các đoạn DNA trong phạm vi kích thước từ 35-45 kb. Tuy nhiên các YAC vector có thể tạo dòng các đoạn DNA có kích thước từ kb. Sau này người ta cũng