tailieunhanh - Hộp Điện Trong Công Nghệ DNA part 22

Tham khảo tài liệu 'hộp điện trong công nghệ dna part 22', kỹ thuật - công nghệ, điện - điện tử phục vụ nhu cầu học tập, nghiên cứu và làm việc hiệu quả | Trên vector phage X người ta cũng đã chọn được các vị trí nhận biết cho các enzyme cắt hạn chế và xây dựng phương pháp đóng gói in vitro in vitro packing để đưa đoạn DNA đã được gắn vào đầu của phage. 2. Tạo dòng trong bacteriophage X Bacteriophage X với genome phức tạp và lớn được dùng như một vector DNA của nó chứa một số vị trí thích hợp cho các RE cần thiết để tạo dòng. Các bước tạo dòng trong phage X được tóm tắt như sau Hình và - Tinh sạch DNA vector bằng ly tâm theo gradient tốc độ hoặc điện di gel sau khi đã được cắt bằng RE. - Các nhánh phải và trái sau đó được liên kết với DNA ngoại lai kích thước khoảng 20 kb có đầu kết thúc tương đồng với đầu của các nhánh. - Kết quả các DNA tái tổ hợp được đóng gói in vitro trong các phage X . - Các phage tái tổ hợp mang các đoạn DNA ngoại lai mong muốn được xác định bằng phương pháp lai nucleic acid. - Tinh sạch và chọn tế bào vật chủ E. coli cho nó sinh sản để duy trì và phân tích các đoạn DNA ngoại lai. . Chọn vector X thích hợp Có hai yếu tố ảnh hưởng đến sự chọn lọc đó là enzyme cắt hạn chế được sử dụng và kích thước DNA ngoại lai. Chỉ khoảng 60 genome nhánh trái và nhánh phải là cần thiết cho sự sinh tan của phage. Khả năng sống sót của phage giảm khi DNA dài hơn 105 hoặc ngắn hơn 78 so với genome tự nhiên đã được đóng gói. Điều quan trọng là chọn vector và DNA ngoại lai như thế nào để kích thước của phage tái tổ hợp nằm trong giới hạn cho phép. Hình . Các bước tạo dòng trong bacteriophage X . DNA nguồn được cắt bằng BamHI và được phân đoạn theo kích thước khoảng 20 kb . Bacteriophage l cũng được phân cắt bằng BamHI. Hai mẫu này được trộn vào nhau và xử lý bằng T4 DNA ligase. Phản ứng gắn xảy ra tạo một bacteriophage X mới tái tổ hợp đoạn stuffer được thay bằng đoạn DNA ngoại lai. Những phân tử này đóng gói in vitro trong đầu của phage X và chúng có thể gây nhiễm sau khi được thêm phần đuôi Hình 4. 10 . Phân tử DNA của phage X . A Tự tái bản DNA từ dạng vòng của X làm cho nó trở thành dạng dây .