tailieunhanh - Hộp Điện Trong Công Nghệ DNA part 9

Tham khảo tài liệu 'hộp điện trong công nghệ dna part 9', kỹ thuật - công nghệ, điện - điện tử phục vụ nhu cầu học tập, nghiên cứu và làm việc hiệu quả | ứng thuận nhóm Y-phosphate được chuyển tới đầu 5 của DNA đã được dephosphoryl hóa mất nhóm phosphate . Trong phản ứng trao đổi khi có một ADP thừa enzyme sẽ chuyển nhóm 5 phosphate từ DNA đã được phosphoryl hóa tới ADP DNA sau đó sẽ được phosphoryl hóa trở lại bằng cách nhận một nhóm Y-phosphate đã được đánh dấu đồng vị phóng xạ từ một phân tử y-32P ATP. - Ứng dụng chính Đánh dấu phóng xạ đầu 5 của DNA để phân tích trình tự bằng phương pháp Maxam và Gilbert 1977 dùng làm mẫu dò trong các kỹ thuật lai phân tử xem chương 5 . Phosphoryl hóa các đoạn nối linker và các đoạn DNA không có nhóm 5 phosphate để chuẩn bị cho phản ứng gắn trong phương pháp tạo dòng. Hoạt tinh Phăn úng Cơ Ch at Phàn ứng thuận enzy me DUA 5-hoặc RNA 5 y-I13JATP d h t kjl t rehol Mg11 - - PTiNAhûâc - - P1RNA ÀCP NA soi đôi hoác sợi đơn mang đầu 5-0H. RNAmang đầu 5 -OH Phàn ứng trao cĩối enzyme 1 sCsGsC. AD p thừa V- ATP ifittKUireilol Mg31 ffpC GsC ACP ATP NA so đon mang đầu 5 phosphate 4. Alkaline phosphatase E. coli và ruột bê Cả hai enzyme alkaline của vi khuẩn bacteria alkaline phosphatase BAP và ruột bê calf intestinal alkaline phosphatase CIP đều xúc tác loại bỏ nhóm 5 phosphate khỏi DNA và RNA. Hoạt tính Phăn úng Cơ ch ất Phosphatase enzyme DNA hoäc sRNA EC DNA hoặc o-RNA NA sọi đôi hoặc sợi cĩơnvàRNA - Ứng dụng chính Loại bỏ nhóm 5 phosphate khỏi DNA hoặc RNA trước khi đánh dấu đầu 5 bằng 32P. Loại bỏ nhóm 5 phosphate khỏi các đoạn DNA để ngăn cản sự tự gắn. Trong kỹ thuật tạo dòng khi một vector được mở vòng DNA bằng một RE rồi sau đó được loại bỏ nhóm 5 phosphate thì nó không thể tự gắn lại tự tái tạo lại vòng . Chỉ khi có đoạn DNA ngoại lai mang các đầu 5 phosphate cần thiết được đưa vào thì phản ứng gắn giữa vector và DNA ngoại lai mới xảy ra. IV. Các enzyme phân cắt Là nhóm các enzyme xúc tác thủy phân liên kết phosphodiester trong phân tử DNA hoặc RNA bao gồm các endonuclease cắt bên trong phân tử nucleic acid và exonuclease cắt bên ngoài phân tử nucleic acid . Các RE cũng là các .