tailieunhanh - Mô phỏng thí nghiệm_Bài mở đầu

Để tiến hành tách ADn từ tế bào thì ta phải tiến hành phá bỏ màng tế bào và màng nhân, sau đó biến tính protein để loại bỏ lượng protein chứa trong dịch tách, loại bỏ RNA và sau cùng là kết tủa ADN bằng cồn. | Thí nghiệm Sinh học phân tử Biên soạn ThS. Nguyễn Thị Lan BÀI MỞ ĐẦU MÔ PHỎNG THÍ NGHIỆM 1. Mô phỏng điện di protein trên điện di đứng. 2. Mô phỏng điện di protein bằng phương pháp điện di 2 chiều. 3. Mô phỏng các phương pháp lai. BÀI 1 CHIẾT TÁCH ADN TỪ TẾ BÀO LÁ NON 1. Vật liệu và hóa chất liệu sinh học Lá non chất Dung dịch đệm CTAB Cetyltrimethyllammonium bromide CTAB 75mM Tris-HCL 15mM EDTA NaCl Đệm kết tủa CTAB 1 CTAB 50mM Tris-HCL 10mM EDTA Đệm TE 10mM Tris-HCl 1mM EDTA Đá khô Nitơ lỏng Chloroform isoamylalcohol 24 1 10mg ml RNase 70 ethanol 1M NaCl 10 CTAB 1 Thí nghiệm Sinh học phân tử Biên soạn ThS. Nguyễn Thị Lan 2. Dụng cụ thiết bị Máy xay Máy li tâm Eppendorf Ống dùng để quay li tâm loại 50 ml Micropipette 20 200 1000pl Bình tam giác 3. Nguyên tắc Để tiến hành tách ADN từ tế bào thì ta phải tiến hành phá bỏ màng tế bào và màng nhân sau đó biến tính protein để loại bỏ lượng protein chứa trong dịch tách loại bỏ RNA và sau cùng là kết tủa ADN bằng cồn. Tủa sau khi thu được được hòa tan lại trong dung dịch đệm TE hoặc nước cất vô trùng tùy theo mục đích nghiên cứu. Khác với tách mô động vật khi tách mô thực vật thì ta phải tiến hành loại bỏ đường thành phần có nhiều trong mô thực vật. Ở đây ta dùng phương pháp tách CTAB tức là dùng dung dịch đệm CTAB để tách ADN ra khỏi mô thực vật. Chất này chỉ hòa tan ADN chứ không hòa tan được đường nhờ vậy mà có thể loại bỏ đường ra khỏi dịch chiết tách ADN. Phá bỏ màng tế bào và màng nhân Người ta có thể phá bỏ màng tế bào và màng nhân bằng phương pháp hóa học hay cơ học. Ở đây chúng ta dùng phương pháp cơ học nghiền nát bằng máy xay và dùng nitơ lỏng để phá bỏ tế bào lá lúa. Chiết ADN và loại bỏ protein Sau khi phá bỏ màng tế bào và nhân thì dùng dung dịch đệm CTAB để hòa tan ADN. Nhưng trong dịch chiết có lẫn protein và ARN nên để thu nhận được ADN tinh sạch ta phải tiến hành bước loại bỏ protein và ARN. Ở đây thường dùng phenol chloroform và isoamylalcohol. Phenol có .