tailieunhanh - Phát triển phương pháp LAMP kết hợp sử dụng chỉ thị màu kép trong chẩn đoán phát hiện virus gây tiêu chảy cấp ở lợn

Đánh giá kết quả của các phản ứng LAMP trong chẩn đoán virus gây tiêu chảy cấp ở lợn hiện tại là tốn thời gian và làm tăng nguy cơ tạp nhiễm cho các phản ứng tiến hành sau đó. Do vậy, trong nghiên cứu này đã phát triển phương pháp LAMP kết hợp sử dụng chỉ thị màu kép cho chẩn đoán phát hiện PEDV. | KHOA HỌC KỸ THUẬT THÚ Y TẬP XXVIII SỐ 1 - 2021 PHAÙT TRIEÅN PHÖÔNG PHAÙP LAMP KEÁT HÔÏP SÖÛ DUÏNG CHÆ THÒ MAØU KEÙP TRONG CHAÅN ÑOAÙN PHAÙT HIEÄN VIRUS GAÂY TIEÂU CHAÛY CAÁP ÔÛ LÔÏN Mai Thị Ngân1 Nguyễn Văn Giáp1 Cao Thị Bích Phượng Huỳnh Thị Mỹ Lệ1 Satoshi Sekiguchi2 1 TÓM TẮT Đánh giá kết quả của các phản ứng LAMP trong chẩn đoán virus gây tiêu chảy cấp ở lợn PEDV hiện tại là tốn thời gian và làm tăng nguy cơ tạp nhiễm cho các phản ứng tiến hành sau đó. Do vậy trong nghiên cứu này chúng tôi đã phát triển phương pháp LAMP kết hợp sử dụng chỉ thị màu kép cho chẩn đoán phát hiện PEDV. Với việc bổ sung thêm chỉ thị màu kép trong thành phần phản ứng LAMP kết quả của quá trình khuếch đại này có thể quan sát bằng mắt thường. Bằng việc bổ sung thêm cặp mồi vòng lặp thời gian của phương pháp LAMP trong chẩn đoán PEDV đã được tối ưu hóa ở 630C trong 40 phút. Kết quả xét nghiệm từ 91 mẫu thực địa cho thấy đây là một phương pháp nhân gen đẳng nhiệt nhanh đơn giản có độ nhạy và độ đặc hiệu cao và kết quả của phản ứng có thể dễ dàng đánh giá bằng mắt thường. Do đó kết quả nghiên cứu của chúng tôi có tính ứng dụng cao trong công tác chẩn đoán nhanh PEDV cũng như các tác nhân gây bệnh khác. Từ khóa Phương pháp LAMP PEDV chỉ thị màu kép RT-PCR. Development of LAMP method incorporating the use of double color indicator in diagnosing and detecting porcine epidemic diarrhea virus Mai Thi Ngan Nguyen Van Giap Cao Thi Bich Phuong Huynh Thi My Le Satoshi Sekiguchi SUMMARY Current LAMP assays for detecting PEDV are time-consuming and carry contamination risk for the following reactions. In this study we developed the LAMP method combining a dual-color indicator for the detection of PEDV. With the addition of a dual-color indicator in the LAMP reaction the results of this amplification process could be observed by the naked eyes. In addition by adding loop primer pairs the LAMP assay for the detection of PEDV was optimized in 40 minutes at 63oC. The result of testing 91 field samples .