tailieunhanh - Tinh sạch protein bằng phương pháp tủa

Phương pháp tủa được sử dụng tương đối rộng rãi để thu nhận các phân tử sinh học mà nhất là protein. Để tủa, người ta có thể dùng nhiều cách khác nhau: tủa bằng muối, tủa bằng các dung môi hữu cơ hoặc thay đổi pH của dung dịch có chứa protein. | Tinh sạch protein bằng phương pháp tủa Phương pháp tủa được sử dụng tương đối rộng rãi đe thu nhận các phân tử sinh học mà nhất là protein. Để tủa người ta có thể dùng nhiều cách khác nhau tủa bằng muối tủa bằng các dung môi hữu cơ hoặc thay đoi pH của dung dịch có chứa protein. 1. Tủa bằng muối Đây là cách phổ biến để tủa protein. Khả năng hòa tan của protein tùy thuộc vào nhiều yếu tố đặc tính lý hóa tự nhiên của protein pH nhiệt độ nồng độ của muối. Ở nồng độ muối thấp tính tan của protein tăng nhẹ salting in . Tuy nhiên ở nồng độ muối cao tính tan của protein giảm mạnh salting out . Đầu tiên giả thuyết salting in ở nồng độ muối thấp được giải thích bởi Debye - Huckel. Trong dung dịch protein được bao bọc xung quanh bởi các ion muối mang điện tích trái dấu. Chính đặc tính này gia tăng hoạt tính của các dung môi làm giảm các phân tử protein không mang điện tích do đó làm tăng tính tan của protein trong dung môi. Giả thuyết của Debye -Huckel cho rằng tính tan của protein được biểu diễn bằng một hàm logarit giá trị của hàm tỉ lệ với căn bậc hai của cường độ ion trong dung dịch. Thuật ngữ salting out trong môi trường có nồng độ muối cao được giải thích bởi Kirkwood. Sự gia tăng lượng ion muối trong dung dịch làm giảm quá trình Solvate hóa giảm tính hòa tan của protein dẫn đến sự tủa. Ở nồng độ muối cao độ hòa tan tuân theo công thức sau của Cohn log S B - KI Trong đó S độ hòa tan của protein B hằng số tùy thuộc vào chức năng của protein pH và nhiệt độ K hằng số salting out tuỳ thuộc vào pH hỗn hợp và lượng muối có trong dung dịch I cường độ ion của muối. Đồ thị hàm log biểu diễn độ hòa tan của protein biến thiên theo nồng .