tailieunhanh - Tạo dòng, biểu hiện và khảo sát hoạt tính enzyme của eugenol oxidase (eugo) trong escherichia coli

Bài viết trình quá trình phân tích sự biểu hiện protein trong tế bào E. coli mang gen EUGO ở một số điều kiện cảm ứng biểu hiện khác nhau cho thấy EUGO biểu hiện tốt ở pha tan khi được cảm ứng ở nhiệt độ 25o C với nồng độ IPTG 0,1 mM trong thời gian 6 giờ. Protein EUGO được tinh sạch bằng kĩ thuật sắc ký ái lực cố định ion Ni2+-NTA agarose và được khảo sát hoạt tính enzyme in vitro. Enzyme EUGO sau khi được tinh sạch có hoạt tính riêng cao hơn chế phẩm enzyme trước tinh sạch gần 4 lần. | Tạp chí Công nghệ Sinh học 17 3 561-567 2019 TẠO DÒNG BIỂU HIỆN VÀ KHẢO SÁT HOẠT TÍNH ENZYME CỦA EUGENOL OXIDASE EUGO TRONG ESCHERICHIA COLI Phạm Thị Mỹ Bình Lê Hải Yến Trần Quốc Tuấn Nguyễn Thị Hồng Thương Trường Đại học Khoa học tự nhiên Đại học Quốc gia Thành phố Hồ Chí Minh Người chịu trách nhiệm liên lạc. E-mail nththuong@ Ngày nhận bài Ngày nhận đăng TÓM TẮT Eugenol oxidase EUGO là enzyme thuộc họ enzyme vanillyl alcohol oxidase có khả năng xúc tác phản ứng oxi hóa vanillyl alcohol thành vanillin hương liệu tạo mùi vani được sử dụng rộng rãi trong công nghiệp thực phẩm mỹ phẩm và dược phẩm. EUGO đã được tạo dòng biểu hiện trong vi khuẩn E. coli TOP10 và được tinh sạch bằng kĩ thuật sắc kí trao đổi anion Q-Sepharose nhưng độ tinh sạch thấp. Nhằm cải thiện hiệu suất quá trình tinh sạch EUGO trong nghiên cứu này chúng tôi tạo dòng và biểu hiện EUGO trong vi khuẩn E. coli Tunetta thông qua vector pET-28a. Kết quả phân tích sự biểu hiện protein trong tế bào E. coli mang gen EUGO ở một số điều kiện cảm ứng biểu hiện khác nhau cho thấy EUGO biểu hiện tốt ở pha tan khi được cảm ứng ở nhiệt độ 25oC với nồng độ IPTG 0 1 mM trong thời gian 6 giờ. Protein EUGO được tinh sạch bằng kĩ thuật sắc ký ái lực cố định ion Ni2 -NTA agarose và được khảo sát hoạt tính enzyme in vitro. Enzyme EUGO sau khi được tinh sạch có hoạt tính riêng cao hơn chế phẩm enzyme trước tinh sạch gần 4 lần. Đặc biệt là phương pháp tinh sạch dựa trên His-tag cho EUGO có độ tinh sạch cao hơn gấp 2 5 lần so với phương pháp tinh sạch Q-sepharose của nhóm nghiên cứu trước đây. Kết quả này cho thấy quá trình tinh sạch enzyme EUGO đã được cải thiện đáng kể. Từ khóa Eugenol oxidase E. coli pET-28a-EUGO vanillin sắc ký ái lực cố định ion MỞ ĐẦU Eugenol oxidase EUGO - enzyme được mã hóa bởi gene eugo có nguồn gốc từ chủng vi khuẩn Vanillin là một loại hương liệu có mùi vani Rhodococcus Jostii RHA1 Nguyen et al. 2016 được sử dụng trong các lĩnh vực khác nhau như thuộc họ .