tailieunhanh - Tạo dòng, biểu hiện và tinh sạch protein tái tổ hợp đoạn đầu protein ToxA của Pasteurella multocida

Nghiên cứu tiến hành tạo dòng và biểu hiện đoạn gen 1,4kb của ToxA mã hóa trình tự axit amin từ 1 đến 487 (Tox1) trên vector biểu hiện pET32b trong Escherichia coli BL21 (DE3). Protein tái tổ hợp Tox1 được biểu hiện mạnh khi cảm ứng với IPTG 1mM và ethanol 3%. | KHOA HỌC KỸ THUẬT THÚ Y TẬP XXVI SỐ 5 - 2019 TAÏO DOØNG BIEÅU HIEÄN VAØ TINH SAÏCH PROTEIN TAÙI TOÅ HÔÏP ÑOAÏN ÑAÀU PROTEIN TOXA CUÛA PASTEURELLA MULTOCIDA Vũ Khắc Hùng1 Trịnh Thị Thu Hằng1 Đỗ Thị Trung Anh Nguyễn Thị Thu Thủy1 Nguyễn Xuân Trường1 2 TÓM TẮT Những nghiên cứu trước đây đã chứng minh toxA là gen độc tố chính của Pasteurella multocida. Vì vậy protein ToxA là một yếu tố tiềm năng cho các nghiên cứu chế tạo vacxin tái tổ hợp phòng bệnh tụ huyết trùng lợn. Trong nghiên cứu này chúng tôi tiến hành tạo dòng và biểu hiện đoạn gen 1 4kb của ToxA mã hóa trình tự axit amin từ 1 đến 487 Tox1 trên vector biểu hiện pET32b trong Escherichia coli BL21 DE3 . Protein tái tổ hợp Tox1 được biểu hiện mạnh khi cảm ứng với IPTG 1mM và ethanol 3 . Sử dụng cột sắc ký ái lực Ni-NTA chúng tôi đã tiến hành tinh sạch Tox1 sau khi hòa tan biến tính trong dung dịch đệm chứa urea 6M. Kết quả điện di SDS-PAGE và Western blot cho thấy protein Tox1 đã được biểu hiện chính xác và tinh sạch đạt tiêu chuẩn về độ tinh khiết. Đây sẽ là nguồn nguyên liệu ban đầu cho những nghiên cứu tiếp theo của chúng tôi để chế tạo vacxin tái tổ hợp phòng bệnh tụ huyết trùng lợn do vi khuẩn Pasteurella multocida gây ra. Từ khóa Pasteurella multocida vacxin tái tổ hợp tạo dòng biểu hiện tinh sạch protein. Cloning expressing and purification of recombinant protein ToxA n-terminal in Pasteurella multocida Vu Khac Hung Trinh Thi Thu Hang Do Thi Trung Anh Nguyen Thi Thu Thuy Nguyen Xuan Truong SUMMARY ToxA has been documented to be the main toxin of Pasteurella multocida. Therefore it is a potential factor for the studies to produce recombinant vaccines against Pasteurellosis in pigs. In this study we cloned and expressed Tox1 protein a N-fragment of ToxA from amino acid 1 to amino acid 487 in Escherichia coli BL21 with pET32b vector. The recombinant Tox1 protein was expressed well when induced with 1mM IPTG and 3 ethanol. The protein was denaturated and dissolved in lysis buffer containing 6M urea and .