tailieunhanh - Thiết kế và tối ưu hóa phản ứng multiplex PCR chẩn đoán đồng thời vi khuẩn than và vi khuẩn dịch hạch

Nghiên cứu này tiến hành thiết kế và tối ưu hóa phản ứng multiplex PCR sử dụng 6 cặp mồi khuếch đại các gen đích VrrA, pagA, capA và ypo2088, pla, caf1 chẩn đoán đồng thời B. anthracis và Y. pestis trên các chủng đã xác định có đầy đủ plasmid độc. Đây là cơ sở cho việc chế tạo kit multiplex PCR chẩn đoán đồng thời B. anthracis và Y. pestis từ mẫu bệnh phẩm lâm sàng và môi trường. | Thiết kế và tối ưu hóa phản ứng multiplex PCR chẩn đoán đồng thời vi khuẩn than và vi khuẩn dịch hạch TAÏP CHÍ Y DÖÔÏC THÖÏC HAØNH 175 - SOÁ 3 - 9 2015 THIẾT KẾ VÀ TỐI ƯU HÓA PHẢN ỨNG MULTIPLEX PCR CHẨN ĐOÁN ĐỒNG THỜI VI KHUẨN THAN VÀ VI KHUẨN DỊCH HẠCH Nguyễn Thái Sơn1 Nguyễn Văn An 1 TÓM TẮT Mục tiêu Nghiên cứu này tiến hành thiết kế và tối ưu hóa phản ứng multiplex PCR sử dụng 6 cặp mồi khuếch đại các gen đích VrrA pagA capA và ypo2088 pla caf1 chẩn đoán đồng thời B. anthracis và Y. pestis trên các chủng đã xác định có đầy đủ plasmid độc. Đây là cơ sở cho việc chế tạo kit multiplex PCR chẩn đoán đồng thời B. anthracis và Y. pestis từ mẫu bệnh phẩm lâm sàng và môi trường. Đối tượng và phương pháp Chủng vi khuẩn than và dịch hạch được lưu giữ tại Học viện Quân y đã được xác định là có đủ các plasmid chứa các gen độc của hai vi khuẩn. Các cặp mồi sử dụng để phát hiện các gen VrrA capA pagA của B. anthracis và các gen ypo 2088 pla caf1 của Y. pestis được thiết kế dựa trên trình tự gen đã được công bố trên Genbank. Chủng vi khuẩn sau khi được bất hoạt bằng nhiệt tiến hành tách triết theo thường qui của bộ kit QIAamp DNA mini kit QIAGEN Đức . Tối ưu hóa phản ứng multiplex PCR để đảm bảo phát hiện được đồng thời các gen đích quan tâm bằng cách tối ưu hóa thành phần và chu trình nhiệt của phản ứng. Kết quả và kết luận Thiết kế và tối ưu hóa thành công phản ứng multiplex PCR chẩn đoán đồng thời vi khuẩn than và dịch hạch sử dụng 6 cặp mồi được thiết kế để khuếch đại 6 gen đích của 2 vi khuẩn trong đó 2 gen trên chromosome VrrA ypo2088 và 4 gen trên plasmid capA pagA pla caf1 . Từ khóa Bacillus anthracis Yersinia pestis multiplex PCR ESTABLISHING A NOVEL MULTIPLEX PCR TO DETECT SIMULTANEOUSLY BACILLUS ANTHRACIS AND YERSINIA PESTIS SUMMARY Objective The study aimed to establish a novel multiplex PCR by using six new specific primer pairs targeting to the VrrA pagA capA and ypo2088 pla caf1 genes of Học viện Quân y 103 1 Người phản hồi Corresponding Nguyễn Văn An .