tailieunhanh - Tần số xuất hiện Vibrio cholerae trên tôm và nhuyễn thể, xác định Serogroup O1, O139 và Biotype của V. cholerae bằng kỹ thuật Multiplex-PCR

Nghiên cứu được thực hiện trên 240 mẫu tôm và nhuyễn thể thu thập ở Đồng Nai, TP. Hồ Chí Minh. Mẫu được tăng sinh bằng hai dung dịch muối pepton kiềm không bổ sung và bổ sung polymycin B 50 UI và 3 % NaCl. DNA ly trích trực tiếp từ dung dịch tăng sinh được kiểm tra bằng 3 phản ứng m–PCR để xác định (i) loài V. cholerae (mPCR1); (ii) serogroup O1, O139 (m-PCR2) và (iii) biotype (m-PCR3). Bên cạnh đó, các gốc vi khuẩn cũng định danh bằng phương pháp sinh hóa và xác định lại bằng các phản ứng m-PCR. | Tần số xuất hiện Vibrio cholerae trên tôm và nhuyễn thể xác định Serogroup O1 O139 và Biotype của V. cholerae bằng kỹ thuật Multiplex-PCR TẦN SỐ XUẤT HIỆN VIBRIO CHOLERAE TRÊN TÔM VÀ NHUYỄN THỂ XÁC ĐỊNH SEROGROUP O1 O139 VÀ BIOTYPE CỦA V. CHOLERAE BẰNG KỸ THUẬT Multiplex-PCR Nguyễn Thị Xuân Trang và Nguyễn Ngọc Tuân Khoa Chăn nuôi Thú y Đại học Nông Lâm TP. HCM TÓM TẮT Nghiên cứu được thực hiện trên 240 mẫu tôm và nhuyễn thể thu thập ở Đồng Nai TP. Hồ Chí Minh. Mẫu được tăng sinh bằng hai dung dịch muối pepton kiềm không bổ sung và bổ sung polymycin B 50 UI và 3 NaCl. DNA ly trích trực tiếp từ dung dịch tăng sinh được kiểm tra bằng 3 phản ứng m PCR để xác định i loài V. cholerae m- PCR1 ii serogroup O1 O139 m-PCR2 và iii biotype m-PCR3 . Bên cạnh đó các gốc vi khuẩn cũng định danh bằng phương pháp sinh hóa và xác định lại bằng các phản ứng m-PCR. Phản ứng m-PCR1 phát hiện V. cholerae trên 44 2 số mẫu ở môi trường 1 và 45 8 số mẫu ở môi trường 2. Trong khi đó phương pháp sinh hóa chỉ phát hiện V. cholerae ở hai môi trường lần lượt là 41 3 và 10 0 . Phản ứng m-PCR2 sử dụng DNA ly trích trực tiếp từ dung dịch tăng sinh kết quả phát hiện gen từ 106 mẫu ở môi trường 1 và 110 mẫu ở môi trường 2 lần lượt là 2 và 2 mẫu dương tính đồng thời hai gen ctxA và rfbO1 8 và 11 mẫu dương tính đồng thời hai gen ctxA và rfbO139 2 và 4 mẫu chỉ dương tính với rfbO1 2 và 4 mẫu chỉ dương tính với rfbO139 13 và 18 mẫu chỉ dương tính với ctxA. Ngoài ra môi trường tăng sinh 2 còn giúp phát hiện được hai mẫu dương tính đồng thời cả 3 gen ctxA rfbO1 và rfbO139. Sử dụng DNA của từng gốc đã định danh kết quả m-PCR2 phát hiện serogroup từ 99 mẫu ở môi trường 1 và 24 mẫu ở môi trường 2 lần lượt là 5 và 3 mẫu dương tính với V. cholerae O139 sinh độc tố CT 11 và 5 mẫu dương tính với V. cholerae O1 O139 không sinh độc tố CT 5 và 2 mẫu dương tính với V. cholerae non O1 O139 sinh độc tố CT. Kết quả phản ứng m-PCR3 cho thấy chỉ 3 trong 6 mẫu phát hiện được gen tcpA đặc trưng cho V. cholerae O1 .