tailieunhanh - PCR giải trình tự

Tài liệu trình bày PCR giải trình tự, các phương pháp hóa học giải trình tự DNA, phương pháp enzyme giải trình tự DNA, giải trình tự bằng máy tự động, giải trình tự bộ gene người, ứng dụng công nghệ giải trình tự tại phòng thí nghiệm NK-Biotek. | Nội dung Text PCR giải trình tự PCR và giải trình tự Giải trình tự là gì DNA là cơ sở hóa học của gen. Phân tử DNA là một chuỗi xoắn kép của hai mạch đơn được cấu tạo từ 4 loại nucleotide khác nhau nhờ các base của chúng đó là A adenine C cytosine G guanine và T thymine . Các nucleotide này nối kết liên tiếp với nhau theo một thứ tự xác định. Giải trình tự của gen tức là phát hiện được thứ tự sắp xếp của 4 loại nucleotide này trên phân tử DNA. Các phương pháp giải trình tự gene 1. Phương pháp hóa học giải trình tự DNA Vào năm 1977 Maxam và Gilbert đã phát minh được một phương pháp hóa học để có thể giải trình tự một đoạn DNA. Nguyên tắc của phương pháp này là 1 Trước hết là phải đánh dấu một đầu của đoạn DNA cần phải giải trình tự bằng một gốc phospho đồng vị phóng xạ 32P 2 Xử lý các đoạn DNA đã đánh dấu này với chất hóa học có thể làm biến đổi đặc hiệu một hoặc hai loại base của nucleotide trên đoạn DNA. Ví dụ dimethylsulphate để biến đổi Guanine bằng các thêm một gốc methyl ở vị trí nitrogen thứ 7 N7 hydrazine làm biến đổi Thymine và Cytosine hydrazine và NaCl để làm biến đổi Cytosine acid để làm biến đổi Guanine và Adenine NaOH để làm biến đổi Adenine và Cytosine với Adenine ưu tiên hơn Cytosine. Như vậy trong giai đoạn này phải dùng ít nhất 4 ống nghiệm và trong mỗi ống nghiệm DNA được xử lý với một lượng rất giới hạn của một trong các chất hóa học nêu trên để mỗi ống nghiệm chỉ có chứa các đoạn DNA mà trên mỗi đoạn DNA này chỉ có một vị trí nucleotide đặc hiệu với chất hóa học là bị biến đổi 3 Các nucleotide bị biến đổi này sẽ bị lấy ra khỏi mạch khung đường-phosphate sugar-phosphate backbone của đoạn DNA và nhờ đó tách ra được các đoạn mạch đơn có một đầu đánh dấu 32P và một đầu bị mất phân tử base vì phân tử này đã bị lấy ra khỏi mạch khung hình 37 . 4 Thực hiện điện di mẫu DNA đã xử lý trong 4 ống nghiệm này trên 4 hàng của một gel polyacrylamide biến tính để các mạch đơn trong mẫu di chuyển trong gel không bị biến đổi trong quá trình điện di. Nhờ đó sau .