tailieunhanh - Nghiên cứu biểu hiện gen mã hóa cho enzyme luciferase trong hệ biểu hiện E.coli

Trong nghiên cứu này, gen mã hóa cho luciferase đom đóm trong vector pGEMT đã được nhân bản bằng PCR và được chuyển vào vector biểu hiện pET43a, để tạo ra vector biểu hiện pET43a-Luc. Vector này được biến nạp vào chủng BL21-DE3 tạo nên dạng tái tổ hợp BL21-DE3-pET43aLuc. | Nghiên cứu biểu hiện gen mã hóa cho enzyme luciferase trong hệ biểu hiện Hóa học & Kỹ thuật môi trường NGHIÊN CỨU BIỂU HIỆN GEN MÃ HÓA CHO ENZYME LUCIFERASE TRONG HỆ BIỂU HIỆN Nghiêm Ngọc Hoa*, Nguyễn Hà Trung, Tô Lan Anh, Trần Thị Thanh Quỳnh, Phạm Kiên Cường Tóm tắt: Luciferase (Luc) là một enzyme quan trọng tham gia vào việc xúc tác cho phản ứng phát quang sinh học. Cơ chế phản ứng phát quang sinh học liên quan đến enzyme luciferase là một quá trình gồm nhiều bước với sự tham gia của ATP, cơ chất luciferin, enzyme luciferase, oxy, ion Magie. Đây cũng là cơ chế phản ứng phát quang sinh học ở đom đóm. Trong nghiên cứu này, gen mã hóa cho luciferase đom đóm trong vector pGEMT đã được nhân bản bằng PCR và được chuyển vào vector biểu hiện pET43a,để tạo ra vector biểu hiện pET43a-Luc. Vector này được biến nạp vào chủng BL21-DE3 tạo nên dạng tái tổ hợp BL21-DE3-pET43a- Luc. Sự biểu hiện của gen mã hóa enzyme Luciferase đã được kiểm tra bằng phương pháp điện di SDS PAGE và thẩm tách miễn dịch. Từ khóa: Luciferase; Đom đóm; Tái tổ hợp. 1. MỞ ĐẦU Từ phản ứng phát sáng được quan sát ở một số sinh vật như nấm, đom đóm, sứa, vi nhà hóa sinh học đã tách chiết thành công chất có khả năng thúc đẩy quá trình phát sáng trong các tế bào sinh vật và thống nhất gọi chúng là luciferase. Luciferase là một thuật ngữ thường được sử dụng để mô tả các enzyme có khả năng xúc tác cho phản ứng phát quang sinh học, thuộc họ protein dạng aldelynate và có một nhóm oxy-4- oxidoreductase để thực hiện các hoạt động chính là khử carboxyl hóa và thủy phân ATP. Bước sóng phát sáng cũng như thành phần tham gia vào phản ứng phát quang ở mỗi loài là khác nhau. Hiện nay đã có trên 20 loại luciferase khác nhau đã được xác định dựa vào nguồn gốc và cơ chế tác dụng của chúng. Trong đó, luciferase của đom đóm được tập trung nghiên cứu nhiều nhất [3,4]. Các gen luciferase đã được phân lập từ một số loài đom đóm [8].