tailieunhanh - Xác định số lượng bản copy và thể đồng hợp tử ở cây lúa chuyển gen OsNAC1 bằng kỹ thuật PCR định lượng thời gian thực

Trong cây chuyển gen, số lượng bản sao của gen chuyển ảnh hưởng lớn tới mức độ biểu hiện và sự ổn định di truyền của gen chuyển. Vì vậy, xác lượng bản sao của gen chuyển là cần thiết. Số lượng bản sao của gen chuyển thường được ước lượng bằng phân tích Southern blot. | Xác định số lượng bản copy và thể đồng hợp tử ở cây lúa chuyển gen OsNAC1 bằng kỹ thuật PCR định lượng thời gian thực Tạp chí Khoa học Công nghệ Nông nghiệp Việt Nam - Số 5(78)/2017 XÁC ĐỊNH SỐ LƯỢNG BẢN COPY VÀ THỂ ĐỒNG HỢP TỬ Ở CÂY LÚA CHUYỂN GEN OsNAC1 BẰNG KỸ THUẬT PCR ĐỊNH LƯỢNG THỜI GIAN THỰC Cao Lệ Quyên1, Phạm Thu Hằng1, Phạm Xuân Hội1 TÓM TẮT Trong cây chuyển gen, số lượng bản sao của gen chuyển ảnh hưởng lớn tới mức độ biểu hiện và sự ổn định di truyền của gen chuyển. Vì vậy, xác lượng bản sao của gen chuyển là cần thiết. Số lượng bản sao của gen chuyển thường được ước lượng bằng phân tích Southern blot. Tuy nhiên, phương pháp này thường tốn nhiều thời gian, đòi hỏi số lượng mẫu thực vật lớn và có thể phải sử dụng các đồng vị phóng xạ nguy hiểm. Vì vậy, trong thí nghiệm này đã sử dụng kỹ thuật PCR định lượng thời gian thực (qRT-PCR) để định lượng số bản copy và xác định thể đồng hợp tử của gen chuyển. Kết quả, từ 51 dòng lúa chuyển gen OsNAC1 thế hệ T0 đã xác định được 28 dòng mang một bản copy và 23 dòng mang hơn một bản copy của gen chuyển. Phân tích di truyền cho phép xác định được 13 dòng lúa thế hệ T1 mang gen ngoại sinh OsNAC1 ở thể đồng hợp tử. Các dòng lúa chuyển gen ở thể đồng hợp tử này sẵn sàng cho việc phân tích khả năng kháng hạn. Từ khóa: Lúa chuyển gen, số lượng bản copy gen chuyển, kỹ thuật PCR định lượng thời gian thực I. ĐẶT VẤN ĐỀ Gần đây, phương pháp Quantitative Real Time Trong quá trình chuyển gen, đoạn ADN mới PCR (qRT-PCR) được áp dụng thành công trong được chèn ngẫu nhiên vào hệ gen của cây chủ, với việc xác định số bản copy gen chuyển và cây mang một hay nhiều bản sao trên một hoặc các vị trí khác kiểu gen đồng hợp tử, thậm chí ngay ở thế hệ T1. nhau của cùng một NST hoặc trên nhiều NST. Số Ưu điểm của phương pháp qRT-PCR là không cần lượng nhiều bản sao của gen ngoại sinh chèn vào hệ đường chuẩn; nồng độ ADN có thể thay đổi chút ít gen vật chủ là nguyên nhân gây bất .