tailieunhanh - Sự phối hợp của Endoglucanase A và Exoglucanase S tái tổ hợp tiết bởi tế bào chủ Bacillus subtilis WB800n

Trong nghiên cứu này, hai enzyme CelA và CelS được tạo dòng và biểu hiện ngoại bào trong chủng chủ Bacillus subtilis WB800N. Kết quả phân tích dịch ngoại bào của các chủng tái tổ hợp bằng Tandem Mass spectrometry cho thấy protein tái tổ hợp đã được tiết thành công. Nhằm đánh giá hiệu quả phối hợp hoạt tính của CelA và CelS, dịch ngoại bào của từng chủng chủ được thu nhận và trộn theo các tỉ lệ khác nhau. | Sự phối hợp của Endoglucanase A và Exoglucanase S tái tổ hợp tiết bởi tế bào chủ Bacillus subtilis WB800n Tạp chí Công nghệ Sinh học 16(1): 157-165, 2018 SỰ PHỐI HỢP CỦA ENDOGLUCANASE A VÀ EXOGLUCANASE S TÁI TỔ HỢP TIẾT BỞI TẾ BÀO CHỦ BACILLUS SUBTILIS WB800N Nguyễn Hoàng Ngọc Phương1,2, Võ Minh Toàn1, Lê Dương Vương1, Phan Thị Phượng Trang1,2, *, Trần Linh Thước2, Nguyễn Đức Hoàng1,2 1 Trung tâm Khoa học và Công nghệ sinh học, Đại học Khoa học tự nhiên Thành phố Hồ Chí Minh 2 Đại học Khoa học tự nhiên, Đại học Quốc gia Thành phố Hồ Chí Minh * Người chịu trách nhiệm liên lạc. E-mail: ptptrang@ Ngày nhận bài: Ngày nhận đăng: TÓM TẮT Việc xây dựng cách tiếp cận để khảo sát hoạt động phối hợp giữa các tiểu đơn vị enzyme là một nhu cầu cần thiết trong định hướng tạo dòng và biểu hiện ngoại bào các thành phần của cellulosome. Endoglucanase A (CelA) và exoglucanase S (CelS) là hai cellulase biểu hiện mạnh trong phức hệ cellulosome của vi khuẩn kị khí, ưa nhiệt Clostridium thermocellum. Trong khi endoglucanase thể hiện hoạt tính rõ rệt với cơ chất cellulose tan carboxymethyl cellulose (CMC) thì exoglucanase vẫn chưa có cơ chất dạng tan chuyên biệt. Trong nghiên cứu này, hai enzyme CelA và CelS được tạo dòng và biểu hiện ngoại bào trong chủng chủ Bacillus subtilis WB800N. Kết quả phân tích dịch ngoại bào của các chủng tái tổ hợp bằng Tandem Mass spectrometry cho thấy protein tái tổ hợp đã được tiết thành công. Nhằm đánh giá hiệu quả phối hợp hoạt tính của CelA và CelS, dịch ngoại bào của từng chủng chủ được thu nhận và trộn theo các tỉ lệ khác nhau. Hoạt tính CMCase từng enzyme và hỗn hợp hai enzyme được đo bằng quy trình định lượng đường khử dinitrosalicylic acid trên đĩa 96 giếng. Phần lớn giá trị hoạt tính CMCase ở các tỉ lệ trộn đều cao hơn tổng giá trị hoạt tính của từng enzyme. Điều này cho thấy có sự cộng hưởng hoạt tính giữa 2 enzyme này trong quá trình thủy phân CMC. .